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液相色譜柱選擇的方法及考慮因素
在選擇液相色譜柱時(shí)，首先應(yīng)確定分離目的確定你的應(yīng)用是否要求高分離度、短分析時(shí)間、高靈敏度、長(zhǎng)柱壽命，低的實(shí)驗(yàn)成本等。其次，評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)..諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性、穩(wěn)定性等。然后選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。
1、填料基質(zhì)
硅膠基質(zhì)：純度高本錢低，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定(高溫可以達(dá)到80度以上)，機(jī)械強(qiáng)度小。
2、顆粒外形
大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒，但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長(zhǎng)的柱壽命在使用高粘度的活動(dòng)相時(shí);不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格。
3、顆粒粒徑
粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
4、含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時(shí)間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
5、孔徑和比表面積
HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此，分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念?？讖叫”缺砻娣e大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保存,上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小，平衡時(shí)間快，適合梯度分析。
6、孔容和機(jī)械強(qiáng)度
孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度?？左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
7、封端封端
封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。