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天津市蘭博實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司

對于液相色譜儀使用的方法具體步驟

時(shí)間:2017-12-23 閱讀:3389
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     液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜及液-固色譜?,F(xiàn)代液相色譜儀由高壓泵、色譜柱、檢測器、溫度控制系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、信號記錄系統(tǒng)和餾分收集器等部分組成。
    液相色譜儀的工作原理是儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運(yùn)動時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,液相色譜儀通過檢測器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
    液相色譜儀的使用方法的具體步驟
    1、色譜柱它包括空柱和填料??罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管,內(nèi)徑為4~5mm,長100~250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動相。等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液,用正己烷或甲醇:水為流動相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2~3萬/ml以上及分離度在1.5以上者,柱效好。
    為防止柱污染,常用1個(gè) 50mm長,4~5mm內(nèi)徑,裝有硅膠或立柱相同填料的保護(hù)柱接在主柱之前,以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng),以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
    2、流動相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動相放于貯液瓶中,經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法,即自洗脫開始到結(jié)束,溶劑的配比恒定。
    另一類為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比,從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離,而整個(gè)色譜過程縮短。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中。
    3、檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應(yīng)用于對紫外光有吸收的藥物,大多數(shù)藥物分子對紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測限有0.1μg左右。液相色譜儀有固定波長型、可變波長型及掃描器,既能使流動相停流作組分的定性定量檢測,又能提高測定靈敏度,重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。
    光強(qiáng)度增加了3~4倍,對某些藥物的檢測限可達(dá)pg級。電化學(xué)檢測器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團(tuán)的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,放大后檢測,檢測限pg級。
    4、數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),除記錄譜外,還能自動記錄峰的保留時(shí)間,能自動積分求算峰面積,并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計(jì)算,報(bào)告分析結(jié)果。

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