T 細(xì)胞分型鑒定

時(shí)間：2025/7/29閱讀：70

免疫細(xì)胞療法包含多種利用宿主免疫反應(yīng)來(lái)治療免疫疾病和癌癥的方法，其中包括 CAR-T 細(xì)胞療法、Treg 療法以及 TILs 療法。以 CAR-T 細(xì)胞療法為例，其整個(gè)工作流程如圖 1 所示，包含了 T 細(xì)胞分離、CAR 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、CAR-T 細(xì)胞培養(yǎng)與擴(kuò)增、細(xì)胞活性檢測(cè)及 CAR 表達(dá)分析等、回輸治療、療效評(píng)估等步驟。

在整個(gè)過(guò)程中 T 細(xì)胞的分型鑒定，Bio-Techne 提供 T Cell 多色流式檢測(cè) Panel，助力您在免疫細(xì)胞療法中快速、準(zhǔn)確地鑒定分析 T 細(xì)胞表型。

圖 1 患者特異性免疫療法流程概覽。供體的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）樣本需經(jīng)過(guò) T 細(xì)胞篩選（Stage 1）和富集（Stage 2）處理。T 細(xì)胞經(jīng)過(guò)改造以表達(dá)嵌合抗原受體（CAR）（Stage 3），從而能夠識(shí)別腫瘤細(xì)胞受體，并在收獲（Stage 5）之前于細(xì)胞培養(yǎng)中進(jìn)行擴(kuò)增（Stage 4）。最終的嵌合抗原受體 T 細(xì)胞（CAR-T 細(xì)胞）產(chǎn)品在重新輸回患者體內(nèi)（Stage 7）之前要先進(jìn)行分型鑒定（Stage 6）。

流式細(xì)胞 Panel 檢測(cè)記憶 T 細(xì)胞

樣本中各類記憶 T 細(xì)胞亞群的比例，會(huì)對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答的擴(kuò)增潛能和功能產(chǎn)生顯著影響。表 1 中是 Bio-Techne 提供的已驗(yàn)證的多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，針對(duì)記憶 T 細(xì)胞標(biāo)志物（如 CD45RO 和 CCR7）對(duì)人 PBMC 進(jìn)行表型分析。

標(biāo)志物	熒光染料	貨號(hào)
CD3	mFluor™ Violet 450	FAB100MFV450
CD4	mFluor™ Violet 500	FAB3791MFV500
CD8	Alexa Fluor™ 700	FAB1509N
CD45RA	mFluor™ Violet 610	FAB11444MFV610
CD45RO	Alexa Fluor™647	FAB10642R
CCR7	PE	FAB197P

表 1 檢測(cè)記憶 T 細(xì)胞的流式細(xì)胞 Panel

流式細(xì)胞 Panel 檢測(cè) T 細(xì)胞活化

T 細(xì)胞在體外接觸到特定抗原或外界刺激時(shí)會(huì)被激活，分析早期和晚期激活標(biāo)志物的表達(dá)模式，能夠加深對(duì)機(jī)體免疫反應(yīng)的理解。表 2 中是 Bio-Techne 提供的已驗(yàn)證的多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，可識(shí)別 T 細(xì)胞上的激活標(biāo)志物，如 CD25、CD69 和 CD38。

標(biāo)志物	熒光染料	貨號(hào)
CD3	mFluor™ Violet 450	FAB100MFV450
CD4	mFluor™ Violet 500	FAB3791MFV500
CD8	Alexa Fluor™ 700	FAB1509N
CD25	mFluor™ Violet 610	FAB1020MFV610
CD38	Alexa Fluor™647	FAB2404R
CD69	PE	FAB23591P

表 2 檢測(cè) T 細(xì)胞活化的流式細(xì)胞 Panel

流式細(xì)胞 Panel 檢測(cè) T 細(xì)胞耗竭

抑制性受體的表達(dá)對(duì)于調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)至關(guān)重要，然而這些受體的異常且持續(xù)表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致免疫功能異常。表 3 中是 Bio-Techne 提供的已驗(yàn)證的多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，可用于分析 T 細(xì)胞中的耗竭標(biāo)志物，如程序性死亡受體 1（PD-1）、T 細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子 3（TIM-3）和淋巴細(xì)胞激活基因 3 蛋白（LAG-3）。

標(biāo)志物	熒光染料	貨號(hào)
CD3	mFluor™ Violet 450	FAB100MFV450
CD4	mFluor™ Violet 500	FAB3791MFV500
CD8	Alexa Fluor™ 700	FAB1509N
LAG-3	mFluor™ Violet 610	FAB23193MFV610
PD-1	Alexa Fluor™647	FAB10863R
TIM-3	PE	FAB2365P

表 3 檢測(cè) T 細(xì)胞耗竭的流式細(xì)胞 Panel

Bio-Techne 流式細(xì)胞 Panel 在 T 細(xì)胞免疫療法中的應(yīng)用如下：

（參考圖 1）

最初，從患者供體中分離出 PBMC。由于 CAR-T 細(xì)胞的最終產(chǎn)量可能會(huì)受到起始原材料的影響，因此通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)記憶 T 細(xì)胞、活化 T 細(xì)胞和耗竭 T 細(xì)胞的比例，為免疫細(xì)胞群體的異質(zhì)性設(shè)定了一個(gè)基準(zhǔn)，并且如果在工程化之前分離 T 細(xì)胞，還可以確定樣本的總體純度（圖 1，Stage 1）。

圖 2 展示了免疫細(xì)胞治療過(guò)程（圖 1）的 Stage 1 (Day 0)，供體 PBMCs 中表達(dá)記憶標(biāo)志物（CD45RO/CD45RA）、激活標(biāo)志物（CD69/CD38）和耗竭標(biāo)志物（TIM-3/LAG-3）的 T 細(xì)胞亞群分型。

圖 2 采用流式細(xì)胞術(shù)的多色 T 細(xì)胞檢測(cè) Panel 對(duì) PBMC 細(xì)胞進(jìn)行 T 細(xì)胞記憶、激活和耗盡的表征。冷凍保存的人（第 0 天）PBMCs 復(fù)蘇后，用三種流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) panel 進(jìn)行染色，以評(píng)估其在 T 細(xì)胞激活之前的初始（na?ve）、記憶、耗竭和激活表型。PBMCs 首先用 anti-human CD3 mFluor™ Violet 450、CD4 mFluor™ Violet 500、CD8 Alexa Fluor^® 700 以及 Live/Dead 750/777 viability dye 進(jìn)行染色，隨后用三種不同的檢測(cè) Panel 分別評(píng)估 T 細(xì)胞的 1）記憶（CD45RO Alexa Fluor^® 647、CD45RA mFluor™ Violet 610 和 CCR7 PE），2）耗竭（PD-1 Alexa Fluor^® 647、TIM-3 PE 和 LAG-3 mFluor™ Violet 610），以及 3）激活（CD25 mFluor™ Violet 610、CD69 PE 和 CD38 Alexa Fluor^® 647）。

在 T 細(xì)胞激活和細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增過(guò)程中（圖 1，Stage 2），通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行免疫表型分析，用于評(píng)估 T 細(xì)胞激活的變化以及 T 細(xì)胞亞群分布的總體變化。這些變化對(duì)于理解 T 細(xì)胞工程的成功與否以及最終產(chǎn)品的產(chǎn)量至關(guān)重要。

圖 3 展示了免疫細(xì)胞治療過(guò)程（圖 1）Stage 2：擴(kuò)增 T 細(xì)胞的第 2 天激活表型以及第 9 天的記憶和耗竭表型鑒定。

圖 3 采用流式細(xì)胞術(shù)的多色 T 細(xì)胞檢測(cè) Panel 對(duì)激活的 T 細(xì)胞進(jìn)行 T 細(xì)胞記憶、激活和耗盡的表征。人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）用生物素標(biāo)記的 GMP Anti-Human CD3（貨號(hào) MAB11411-GMP）和 GMP Anti-Human CD28（貨號(hào) MAB11412-GMP）與 M-270 磁珠偶聯(lián)，并加入 200 IU/mL 的 GMP Recombinant Human IL-2（貨號(hào) BT-202-GMP）刺激 9 天。第 9 天擴(kuò)增的 T 細(xì)胞 anti-human CD3 mFluor™ Violet 450、CD4 mFluor™ Violet 500、CD8 Alexa Fluor^® 700 以及 Live/Dead 750/777 viability dye 進(jìn)行染色，隨后用三種不同的檢測(cè) Panel 分別評(píng)估 T 細(xì)胞的 1）記憶（CD45RO Alexa Fluor^® 647、CD45RA mFluor™ Violet 610 和 CCR7 PE），2）耗竭（PD-1 Alexa Fluor^® 647、TIM-3 PE 和 LAG-3 mFluor™ Violet 610），以及 3）激活（CD25 mFluor™ Violet 610、CD69 PE 和 CD38 Alexa Fluor^® 647）。

流式細(xì)胞術(shù)可檢測(cè)供體 T 細(xì)胞之間的記憶、激活和耗竭標(biāo)志物的差異。圖 4 展示了從第 0 天到第 2 天（用于激活）或第 9 天（用于記憶和耗竭）使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，可以提供關(guān)于供體 T 細(xì)胞隨時(shí)間變化的定量數(shù)據(jù)。

圖 4 T 細(xì)胞記憶、激活和耗竭檢測(cè) Panel 追蹤檢測(cè) T 細(xì)胞群隨時(shí)間的變化。人 PBMCs 被用生物素標(biāo)記的 GMP Anti-Human CD3 (貨號(hào) MAB11411-GMP) 和 GMP Anti-Human CD28 (貨號(hào) MAB11412-GMP) 與 M-270 Dynabeads + 200 IU/mL GMP Recombinant Human IL-2 (貨號(hào) BT-202-GMP) 刺激 9 天，如圖 4。在激活后，分析了 Day 0（Stage1）和 Day 9（A、B）以及 Day 2（C）的 CD45RO+/CCR7+中央記憶 T 細(xì)胞（A）、PD-1+細(xì)胞（B）和 CD25+/CD69+細(xì)胞（C）的表達(dá)差異。

99超碰中文字幕在线观看-天天干天天日天天舔婷婷-我看操逼的好看的女人的-日本一二三四五区日韩精品

T 細(xì)胞分型鑒定

會(huì)員登錄

收藏該商鋪

提示