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Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡/周期檢測(cè)試劑盒工作原理詳解

閱讀:109      發(fā)布時(shí)間:2025-6-9
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試劑盒組成及作用

Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡/周期檢測(cè)試劑盒主要包含 Annexin V-FITC、PI 和結(jié)合緩沖液。Annexin V-FITC 是將 Annexin V 與 FITC 標(biāo)記形成的復(fù)合物,PI 是一種核酸染料。結(jié)合緩沖液含有鈣離子,可為 Annexin V 與 PS 結(jié)合提供適宜環(huán)境,維持細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定,減少非特異性結(jié)合。

工作原理

細(xì)胞膜的不對(duì)稱性和 PS 的外翻

正常細(xì)胞膜的磷脂分布具有不對(duì)稱性,磷脂酰絲氨酸(PS)位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)。細(xì)胞凋亡時(shí),PS 會(huì)在早期從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到外側(cè),這一變化是檢測(cè)細(xì)胞凋亡的重要標(biāo)志之一。

Annexin V-FITC 與 PS 的結(jié)合

Annexin V 是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白,對(duì) PS 具有高親和力。在細(xì)胞凋亡早期,Annexin V-FITC 可與外翻至細(xì)胞膜外側(cè)的 PS 結(jié)合,從而識(shí)別早期凋亡細(xì)胞。

PI 的染色作用

PI 不能透過(guò)活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的完整細(xì)胞膜,但能透過(guò)晚期凋亡和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜,與細(xì)胞核中的 DNA 結(jié)合,使細(xì)胞核染色。通過(guò) Annexin V-FITC 和 PI 的聯(lián)合染色,可以區(qū)分活細(xì)胞(Annexin V-FITC-/PI-)、早期凋亡細(xì)胞(Annexin V-FITC+/PI-)、晚期凋亡細(xì)胞(Annexin V-FITC+/PI+)和壞死細(xì)胞(Annexin V-FITC-/PI+)。

檢測(cè)方法

流式細(xì)胞術(shù)

流式細(xì)胞術(shù)是目前常用的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法之一,具有快速、靈敏、定量分析等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)設(shè)置未染色組、PI 單染組及 Annexin V-FITC 單染組等對(duì)照,調(diào)整流式細(xì)胞儀的電壓和光補(bǔ)償后,可準(zhǔn)確區(qū)分不同狀態(tài)的細(xì)胞。Annexin V-FITC 的最大激發(fā)波長(zhǎng)為 488nm,發(fā)射波長(zhǎng)為 525nm,在 FL1 通道檢測(cè);PI-DNA 的最大激發(fā)波長(zhǎng)為 535nm,發(fā)射波長(zhǎng)為 617nm,在 FL2 或 FL3 通道檢測(cè)。

熒光顯微鏡檢測(cè)

對(duì)于懸浮細(xì)胞,可按照流式細(xì)胞術(shù)步驟操作后,將細(xì)胞懸液置于玻片上進(jìn)行觀察。對(duì)于貼壁細(xì)胞,可在孔板中放置細(xì)胞爬片,待細(xì)胞貼壁后進(jìn)行誘導(dǎo)凋亡、染色等操作,再用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。在熒光顯微鏡下,早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光,壞死細(xì)胞呈紅色熒光。

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