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在細(xì)胞生物學(xué)研究中，細(xì)胞計(jì)數(shù)是一項(xiàng)基礎(chǔ)但至關(guān)重要的實(shí)驗(yàn)步驟，直接影響實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。傳統(tǒng)的血球計(jì)數(shù)板（Hemocytometer）長(zhǎng)期以來(lái)是實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)工具，但隨著技術(shù)的發(fā)展，自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀逐漸成為更高效、更準(zhǔn)確的選擇。本文將對(duì)兩種方法進(jìn)行詳細(xì)對(duì)比，以便實(shí)驗(yàn)者有更清晰的了解。

血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)方法與操作

1. 血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)

血球計(jì)數(shù)板（Hemocytometer）是一種特制載玻片，通過(guò)精密蝕刻的網(wǎng)格系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的手動(dòng)計(jì)數(shù)和濃度計(jì)算。計(jì)數(shù)區(qū)由 9個(gè)1mm×1mm大方格 組成，四角的大方格分成16個(gè)中型方格，中央大方格分成400個(gè)小格（一般是16個(gè)中格 x 25個(gè)小格）。計(jì)數(shù)室深度固定為 0.1mm，因此每個(gè)大方格的體積為 0.1μL或者0.1mm³（1mm×1mm×0.1mm）。

2. 細(xì)胞分布假設(shè)

通過(guò)統(tǒng)計(jì)特定區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量，推算整體濃度（細(xì)胞數(shù)/mL）。基于泊松分布原理，要求細(xì)胞均勻分布且無(wú)聚集。如遇成團(tuán)細(xì)胞，或者有細(xì)胞碎片，可能會(huì)影響到計(jì)數(shù)結(jié)果。

3. 操作步驟

? 樣本制備：將細(xì)胞懸液稀釋至合適濃度（通常 10?–10? cells/mL）。

? 加樣：取 10 µL 細(xì)胞懸液（如需染色，混合10μL細(xì)胞懸液 + 10μL臺(tái)盼藍(lán)）柔吹打或倒置混勻。用移液器將 10μL 混合液滴加至計(jì)數(shù)板蓋玻片邊緣，依靠毛細(xì)作用填充計(jì)數(shù)室。液體應(yīng)自然鋪滿計(jì)數(shù)區(qū)，無(wú)氣泡（否則需重做）。

? 顯微鏡觀察：一般在 10× 或 20× 物鏡下觀察，計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角4個(gè)中方格的細(xì)胞數(shù)量。為了防止相鄰的方格間重復(fù)統(tǒng)計(jì)，壓在方格線上的細(xì)胞遵循記上不記下，記左不記右的原則。

? 計(jì)算濃度：                                       

以16個(gè)中格x 25個(gè)小格為例，四角的4個(gè)中格中一共有4x25 個(gè)（100個(gè)）小格。

每小格細(xì)胞均數(shù)=100格細(xì)胞總數(shù) ÷ 100

細(xì)胞濃度（cell/mL）=小方格中細(xì)胞平均數(shù)x400 x 10 x 1000 x 稀釋倍數(shù)

其中：

中央大方格的細(xì)胞數(shù)=小方格細(xì)胞平均數(shù)x400 （0.1mm³）

x 10 轉(zhuǎn)換為 1mm³ 中的細(xì)胞數(shù)

x 1000 轉(zhuǎn)換為 1cm³（1mL）中的細(xì)胞數(shù)

血球計(jì)數(shù)板的計(jì)算公式本質(zhì)
將局部計(jì)數(shù)換算到 1 mL 體積，核心在于：

1. 數(shù)清細(xì)胞數(shù) × 稀釋倍數(shù)。

2. 除以實(shí)際計(jì)數(shù)的體積（通過(guò)選定方格區(qū)域和方格數(shù)）。

血球計(jì)數(shù)板的局限性

1. 主觀性強(qiáng)：依賴操作者的經(jīng)驗(yàn)，不同實(shí)驗(yàn)者可能得出不同結(jié)果。比如如果細(xì)胞較大，有的實(shí)驗(yàn)者可能依然使用中央大方格，有的實(shí)驗(yàn)者可能或選擇四角的4個(gè)大方格；壓線細(xì)胞的計(jì)數(shù)和成團(tuán)細(xì)胞的計(jì)數(shù)也可能因人而異。

2. 耗時(shí)：每個(gè)樣本需 3–5 分鐘，重復(fù)計(jì)數(shù)更費(fèi)時(shí)。

3. 誤差大：

· 細(xì)胞分布不均導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏差。

· 成團(tuán)細(xì)胞難以準(zhǔn)確分辨。

· 活/死細(xì)胞判斷依賴臺(tái)盼藍(lán)染色，顯微鏡下顏色差異不大，不容易區(qū)分，易受主觀影響。

隨著成像技術(shù)的進(jìn)步，細(xì)胞計(jì)數(shù)已實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，從而在更短的時(shí)間和更少的努力下提供更高的準(zhǔn)確性和可靠性。。

Countess 3 和 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀與血球計(jì)數(shù)板的細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)比

細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性
主觀性導(dǎo)致的變異性
無(wú)論采用何種細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，依賴操作員的判斷都會(huì)導(dǎo)致結(jié)果誤差。顯微鏡和某些自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的光強(qiáng)度和焦距設(shè)置具有主觀性，可能導(dǎo)致結(jié)果不一致。操作員還需決定哪些對(duì)象應(yīng)納入或排除在細(xì)胞計(jì)數(shù)中。如果測(cè)量細(xì)胞活性，操作員還需判斷哪些細(xì)胞應(yīng)計(jì)為死細(xì)胞或活細(xì)胞。手動(dòng)計(jì)數(shù)中的這些主觀變量可能導(dǎo)致不同操作員之間的結(jié)果差異較大。

Countess 3 和 Countess 3 FL 細(xì)胞計(jì)數(shù)器可以消除許多主觀變量并節(jié)省時(shí)間。這些儀器采用先進(jìn)算法自動(dòng)確定最佳焦距和光強(qiáng)度，并通過(guò)定量測(cè)量（如細(xì)胞大小、亮度和圓度）來(lái)篩選細(xì)胞，而非依賴操作員的判斷，從而減少主觀性誤差并提高樣本和用戶間的重復(fù)性（圖1）。

圖1. 血球計(jì)數(shù)板與 Countess 3 FL 儀器的用戶間變異性比較。三名實(shí)驗(yàn)者員分別使用 Countess 3 FL 細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì) PBMC、CHO-K1、HeLa、HEK293 和 Jurkat 細(xì)胞的單一樣本進(jìn)行計(jì)數(shù)，隨后使用血球計(jì)數(shù)板和顯微鏡手動(dòng)計(jì)數(shù)。血球計(jì)數(shù)板的用戶間變異性顯著高于 Countess 3 FL 儀器。

計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)量
在實(shí)際操作中，許多研究人員未計(jì)數(shù)足夠數(shù)量的細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果不可靠且標(biāo)準(zhǔn)差較高。為了節(jié)省手動(dòng)計(jì)數(shù)時(shí)間，許多用戶僅計(jì)數(shù)傳統(tǒng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀網(wǎng)格中的一兩個(gè)方格。增加計(jì)數(shù)方格（即更大的面積）通常會(huì)提高結(jié)果的一致性，但需要更多時(shí)間。Countess 3 和 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在10秒的計(jì)數(shù)時(shí)間內(nèi)可覆蓋近四個(gè)傳統(tǒng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀方格的等效面積，從而通過(guò)減少細(xì)胞分布變異的影響提高計(jì)數(shù)一致性（圖2）。

圖2. 計(jì)數(shù)面積。Countess 3 儀器的計(jì)數(shù)面積與傳統(tǒng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的對(duì)比。

重復(fù)計(jì)數(shù)

無(wú)論采用何種細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，多次重復(fù)計(jì)數(shù)均可減少樣本的變異性。Countess 3 和 Countess 3 FL 儀器可在血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀完成一次計(jì)數(shù)（最多5分鐘）的時(shí)間內(nèi)完成多次重復(fù)計(jì)數(shù)，從而提高結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信度。由于時(shí)間限制，尤其是在需要計(jì)數(shù)多個(gè)細(xì)胞樣本時(shí)，重復(fù)計(jì)數(shù)常被手動(dòng)計(jì)數(shù)方法忽略。

成團(tuán)細(xì)胞

對(duì)于含有成團(tuán)細(xì)胞的樣本，手動(dòng)計(jì)數(shù)和某些自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀難以獲得準(zhǔn)確結(jié)果。成團(tuán)細(xì)胞的常見(jiàn)挑戰(zhàn)在于如何區(qū)分細(xì)胞邊界以確定團(tuán)塊中的細(xì)胞數(shù)量。某些自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀僅能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)不超過(guò)五個(gè)細(xì)胞的團(tuán)塊。Countess 3 和 Countess 3 FL 儀器的先進(jìn)計(jì)數(shù)算法可清晰識(shí)別復(fù)雜細(xì)胞團(tuán)塊中的邊界，從而提供準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)（圖3）。

除了識(shí)別團(tuán)塊中的單細(xì)胞外，Countess 3 和 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀還能檢測(cè)細(xì)胞聚集并測(cè)量樣本中的總聚集百分比。屏幕顯示通過(guò)不同顏色區(qū)分團(tuán)塊和單細(xì)胞，明場(chǎng)模式則可直觀確認(rèn)團(tuán)塊中的細(xì)胞。

圖3. 即使樣本中存在成團(tuán)細(xì)胞，仍能獲得準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。Countess 3 細(xì)胞計(jì)數(shù)器的分割和計(jì)數(shù)算法成功解析了 U2OS 人骨肉瘤細(xì)胞樣本中的團(tuán)塊，并顯示樣本中的聚集百分比。

熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)
熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)相比非熒光方法具有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)：背景對(duì)比度更高，便于識(shí)別和計(jì)數(shù)細(xì)胞；可使用不同熒光標(biāo)記區(qū)分和計(jì)數(shù)多種細(xì)胞類型；減少將碎片誤判為細(xì)胞的可能性，從而提高結(jié)果準(zhǔn)確性。

Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀配備兩個(gè)可選的可互換熒光通道，通過(guò)插入不同光立方收集顏色（提供超過(guò)20種光立方）。儀器自動(dòng)確定最佳照明條件，并支持兩種計(jì)數(shù)模式：明場(chǎng)和熒光。明場(chǎng)模式利用明場(chǎng)圖像識(shí)別細(xì)胞并快速報(bào)告熒光陽(yáng)性細(xì)胞百分比；熒光模式則通過(guò)一個(gè)或兩個(gè)熒光通道計(jì)數(shù)所有熒光對(duì)象，并報(bào)告總計(jì)數(shù)及各通道的熒光細(xì)胞分布（圖4）。

圖4. 使用 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和兩個(gè)光立方進(jìn)行熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞經(jīng) Invitrogen™ ReadyCount™ 綠/紅細(xì)胞活性染色（貨號(hào) A49905）后，采用兩種方法計(jì)數(shù)：（A）明場(chǎng)模式下的 U2OS 細(xì)胞，顯示所有識(shí)別細(xì)胞；（B）熒光模式下的 PBMC，僅顯示熒光陽(yáng)性細(xì)胞。

節(jié)約成本
采用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的阻礙之一是專用一次性載玻片的持續(xù)成本。血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可無(wú)限次清洗和重復(fù)使用，而許多自動(dòng)系統(tǒng)需依賴一次性載玻片。Countess 3 和 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀設(shè)計(jì)兼容可重復(fù)使用的玻璃載玻片（圖5），同時(shí)也支持一次性載玻片。這一創(chuàng)新使實(shí)驗(yàn)室能夠在無(wú)需承擔(dān)高昂耗材成本的情況下采用先進(jìn)的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法。

圖5. Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的可重復(fù)使用載玻片有助于降低耗材成本。

節(jié)省時(shí)間
手動(dòng)計(jì)數(shù)（最多5分鐘）與 Countess 3 和 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（幾十秒）的時(shí)間差常被忽視。若每天計(jì)數(shù)五張載玻片（每張兩個(gè)樣本），改用自動(dòng)計(jì)數(shù)器搭配可重復(fù)使用載玻片每月可節(jié)省約10小時(shí)；使用一次性載玻片則可節(jié)省約15小時(shí)（圖6）。這些時(shí)間可用于實(shí)驗(yàn)室的其他工作，從而顯著提升效率。

圖6. 從手動(dòng)計(jì)數(shù)切換到自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀后，每月預(yù)估節(jié)省的時(shí)間。

可獲取的信息
血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀僅能提供樣本中的總細(xì)胞數(shù)、活細(xì)胞數(shù)和死細(xì)胞數(shù)。自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀還可獲取更多數(shù)據(jù)，如平均細(xì)胞大小、基于熒光強(qiáng)度或細(xì)胞大小的分布直方圖（圖7）。Countess 3 和 Countess 3 FL 儀器可將數(shù)據(jù)以 CSV 格式保存至 USB 驅(qū)動(dòng)器，原始圖像和結(jié)果界面也可保存并傳輸至電腦。

圖7. 結(jié)果顯示平均細(xì)胞大小和細(xì)胞大小分布，有助于靶向特定細(xì)胞群。

Countess 3 和 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀與血球計(jì)數(shù)板的細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)比總結(jié)
自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)相比手動(dòng)計(jì)數(shù)具有顯著優(yōu)勢(shì)，包括更高的準(zhǔn)確性、簡(jiǎn)化的工作流程和大幅節(jié)省的時(shí)間。盡管存在這些優(yōu)勢(shì)，一次性載玻片的成本曾是采用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)的障礙。Countess 3 和 Countess 3 FL 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀兼容可重復(fù)使用載玻片，降低了自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)的成本，使更多實(shí)驗(yàn)室能夠負(fù)擔(dān)這一先進(jìn)技術(shù)，從而獲得更快、更準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)結(jié)果。

對(duì)于需要 較高通量、高準(zhǔn)確性 的現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室，Countess 3 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀 是比傳統(tǒng)血球計(jì)數(shù)板更優(yōu)的選擇。它不僅解決了手動(dòng)計(jì)數(shù)的固有缺陷（如主觀性和低效性），還通過(guò) 自動(dòng)化、熒光分析和可重復(fù)使用耗材 進(jìn)一步降低了實(shí)驗(yàn)成本。

Countess 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀特點(diǎn)

引入人工智能，助力 Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀像細(xì)胞生物學(xué)家那樣“思考"，從而以簡(jiǎn)單、快速并且以自動(dòng)方式生成準(zhǔn)確、可重復(fù)的計(jì)數(shù)結(jié)果。其應(yīng)用范圍不僅限于計(jì)數(shù)，還擴(kuò)展到細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)染效率等方面。

準(zhǔn)確且精確

當(dāng)您使用自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，它的準(zhǔn)確性和精確度和您一樣，甚至更佳。準(zhǔn)確性意味著它會(huì)正確地進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，精確度意味著無(wú)論操作者是誰(shuí)，它每次都會(huì)產(chǎn)生相同的結(jié)果。

引入人工智能。Countess 3（明場(chǎng)）和 Countess 3 FL（明場(chǎng)和熒光）全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀值得信任，它們使用深度學(xué)習(xí)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)算法開(kāi)發(fā)，每次都能進(jìn)行準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)。該算法是由專業(yè)科學(xué)家根據(jù)包含數(shù)十種不同細(xì)胞類型和樣品的數(shù)百個(gè)培養(yǎng)板進(jìn)行細(xì)胞識(shí)別優(yōu)化而成。

由此打造的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能夠像細(xì)胞生物學(xué)家一樣“思考"，即便是外周血單核細(xì)胞 (PBMC)、成團(tuán)細(xì)胞以及含細(xì)胞碎片等具有挑戰(zhàn)性的細(xì)胞樣品也可輕松勝任。在高分辨率的 Countess 屏幕上，您可以看到正在計(jì)數(shù)的細(xì)胞以及未計(jì)數(shù)的細(xì)胞碎片。

與手動(dòng)血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)相比，使用 Countess 3 進(jìn)行自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)可以減少多種原因造成的數(shù)據(jù)錯(cuò)誤和差異，包括操作者主觀性、視覺(jué)疲勞、計(jì)數(shù)區(qū)域差異和挑戰(zhàn)性樣本。Countess 3 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀兼具手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)的精確度，而又無(wú)需流式細(xì)胞術(shù)所需的支出或培訓(xùn)。

機(jī)器學(xué)習(xí)算法可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)，可與流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)媲美。

使用 Attune NxT 流式細(xì)胞儀（紫色直方圖）、Countess 3 FL 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（紅色直方圖）以及血球計(jì)數(shù)板和顯微鏡（手動(dòng)計(jì)數(shù)，灰色直方圖）對(duì) CHO-K1、HeLa、HEK293、Jurkat 和人 PBMC 進(jìn)行了計(jì)數(shù)。 Countess 3 FL 儀器和血球計(jì)數(shù)板直方圖代表了 6 個(gè)獨(dú)立計(jì)數(shù)的平均值且高度一致。手動(dòng)計(jì)數(shù)的誤差（計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差）要比 Countess 3 計(jì)數(shù)或流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)更寬。

擴(kuò)展計(jì)數(shù)區(qū)域。為了節(jié)省手動(dòng)計(jì)數(shù)的時(shí)間，許多實(shí)驗(yàn)人員只對(duì)血球計(jì)數(shù)板網(wǎng)格上的一個(gè)或兩個(gè)方塊進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算更多方塊（更大區(qū)域）通常會(huì)獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果，但需要額外增加時(shí)間。Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀查詢的區(qū)域接近包含四個(gè)方塊，通過(guò)減少細(xì)胞分布變化的影響提高了準(zhǔn)確性。并且 Countess 可以在不到 30 秒的時(shí)間內(nèi)完成自動(dòng)聚焦、自動(dòng)亮度調(diào)整、圖像采集和計(jì)數(shù)。

手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)與自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)的計(jì)數(shù)區(qū)域?qū)Ρ?/span>

Countess 3 的計(jì)數(shù)區(qū)域約為標(biāo)準(zhǔn)血球計(jì)數(shù)板的 3.8 倍。

處理成團(tuán)細(xì)胞和碎片。由于難以辨別細(xì)胞之間的邊界，因此成團(tuán)細(xì)胞難以進(jìn)行手動(dòng)計(jì)數(shù)，甚至對(duì)自動(dòng)化計(jì)數(shù)儀也具有挑戰(zhàn)性。樣品含有碎片則進(jìn)一步增加了計(jì)數(shù)的復(fù)雜性。Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可以在進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)自動(dòng)排除碎片，其先進(jìn)的算法可以清楚地識(shí)別細(xì)胞團(tuán)塊內(nèi)的細(xì)胞邊界，從而實(shí)現(xiàn)高度準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)。

先進(jìn)的算法可實(shí)現(xiàn)對(duì)成團(tuán)細(xì)胞和樣品碎片的準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。

在明場(chǎng)模式下使用 Countess 3 FL 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)微小且容易成團(tuán)的 RAW（小鼠小噬細(xì)胞）進(jìn)行了計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)算法能分辨出團(tuán)塊中的細(xì)胞，正確圈出細(xì)胞并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)?；罴?xì)胞具有綠色輪廓，死細(xì)胞則具有紅色輪廓。碎片（未勾勒輪廓）會(huì)在計(jì)數(shù)時(shí)自動(dòng)忽略。

快速

Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能在不到30 秒的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生結(jié)果。通過(guò)快速采集、自動(dòng)亮度調(diào)整、自動(dòng)聚焦和自動(dòng)保存，用戶需要做的就是加入樣品和插入細(xì)胞計(jì)數(shù)板。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的時(shí)間十分珍貴，使用 Countess 3 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，即可快速完成細(xì)胞計(jì)數(shù)等多種分析。              

除了計(jì)數(shù)速度飛快外，Countess 3 系統(tǒng)還精簡(jiǎn)了細(xì)胞計(jì)數(shù)的流程，淘汰了許多與手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)的繁瑣步驟，其中包括亮度和聚焦調(diào)整、計(jì)算細(xì)胞濃度以及制作報(bào)告。節(jié)省了更多的時(shí)間。如果您的實(shí)驗(yàn)室每天計(jì)數(shù)五張玻片，可以每月節(jié)省 10–15 小時(shí)（具體取決于所選玻片）；如果您每天計(jì)數(shù) 25 張玻片，則可以節(jié)省 50–75 小時(shí)！這些額外獲得的時(shí)間可以用來(lái)完成實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞培養(yǎng)處理和其他活動(dòng)，在從手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)切換到全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。

簡(jiǎn)單

使用 Countess 3 或 Countess 3 FL 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在明場(chǎng)模式下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的過(guò)程簡(jiǎn)單而又輕松。只需準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板，啟用快速捕獲和自動(dòng)保存，然后插入計(jì)數(shù)板。其余工作交給儀器自動(dòng)完成：亮度調(diào)整、聚焦和計(jì)數(shù)。

自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)不僅比手動(dòng)計(jì)數(shù)操作更簡(jiǎn)單，而且需要的操作培訓(xùn)也更少。

靈敏的觸摸屏和直觀的界面。直觀易用的Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀軟件。靈敏的 LCD 觸摸屏不需要外部計(jì)算機(jī)。該屏幕的 1280 x 800 分辨率提供高質(zhì)量的細(xì)胞圖像，可通過(guò)輔助工具進(jìn)行活/死細(xì)胞計(jì)數(shù)，使用 Countess 3 FL 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，可實(shí)現(xiàn)熒光可視化。顯示屏與整個(gè)儀器齊平，便于清潔。

觸摸屏界面可以輕松顯示計(jì)數(shù)的細(xì)胞群，例如，創(chuàng)建“門(mén)"，根據(jù)細(xì)胞大小、亮度、圓度和/或熒光強(qiáng)度從計(jì)數(shù)中排除不需要的細(xì)胞。  通過(guò)選擇結(jié)果屏幕右上角的圖形圖標(biāo)，在直方圖或散點(diǎn)圖中查看您的細(xì)胞信息。當(dāng)使用滑塊控件調(diào)整門(mén)控參數(shù)時(shí)，您可以實(shí)時(shí)查看直方圖或散點(diǎn)圖的變化。為方便起見(jiàn)，柱狀圖底部顯示平均細(xì)胞大?。ㄓ糜诿鲌?chǎng)計(jì)數(shù)）或熒光強(qiáng)度（用于熒光計(jì)數(shù)）。

觸摸屏界面可以讓您從結(jié)果屏幕快速移動(dòng)到直方圖和散點(diǎn)圖屏幕。 直方圖和散點(diǎn)圖可根據(jù)大小、亮度和圓度顯示細(xì)胞群和設(shè)門(mén)。

直觀的設(shè)門(mén)界面

在此散點(diǎn)圖中，細(xì)胞群被視為活（綠色）和死（紅色）群。軸的大小和圓度可以改變。

在此直方圖中，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量和相對(duì)熒光單位 (RFU) 繪制細(xì)胞群。使用右側(cè)的設(shè)門(mén)場(chǎng)和明場(chǎng) (BF)，您可以使用設(shè)門(mén)菜單左側(cè)的滑塊根據(jù)大小、亮度和圓度進(jìn)行設(shè)門(mén)。如果選擇德州紅 (TX Red) 或 GFP，則可以執(zhí)行 RFU 強(qiáng)度的設(shè)門(mén)。

自動(dòng)

使用 Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀時(shí)，不僅計(jì)數(shù)自動(dòng)化完成，系統(tǒng)還會(huì)自動(dòng)調(diào)整亮度和聚焦以獲得最佳對(duì)比度和分辨率，并會(huì)自動(dòng)保存細(xì)胞計(jì)數(shù)和數(shù)據(jù)（如果您選擇該選項(xiàng)）。軟件還包括方便的內(nèi)置預(yù)稀釋和細(xì)胞傳代計(jì)算器，這些為細(xì)胞培養(yǎng)工作提供很大便利。

預(yù)稀釋計(jì)算器

如果您的細(xì)胞樣品是濃縮樣品，您在計(jì)數(shù)前進(jìn)行了稀釋，請(qǐng)?jiān)诖颂庉斎霕悠泛途彌_液體積，Countess 3 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀會(huì)自動(dòng)重新計(jì)算樣品濃度。該濃度還將考慮添加臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行明場(chǎng)活性測(cè)定。

細(xì)胞傳代計(jì)算器

如果您的下游實(shí)驗(yàn)確定特定濃度的樣本，請(qǐng)?jiān)诖颂庉斎胨铦舛群腕w積、Countess 3 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀將自動(dòng)計(jì)算所需的細(xì)胞樣品和緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)基量。計(jì)算時(shí)將自動(dòng)包括您的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。

保存結(jié)果和報(bào)告。您可以將細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果、細(xì)胞數(shù)據(jù)和圖像保存到 USB 驅(qū)動(dòng)器，或使用 Wi-Fi 保存到 Thermo Fisher™ Connect 云端平臺(tái)。結(jié)果保存為兼容電子表格的 CSV 文件，細(xì)胞數(shù)據(jù)保存為流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn) FCS 文件，而圖像可以保存為 TIFF、PNG 或 JPG 格式。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外隨時(shí)訪問(wèn)這些文件——您可以在需要時(shí)隨時(shí)隨地獲得數(shù)據(jù)。

您還可以保存包含結(jié)果、圖像和設(shè)置可打印的 PDF 報(bào)告。

不局限于計(jì)數(shù)的應(yīng)用

Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的功能遠(yuǎn)非單純的細(xì)胞計(jì)數(shù)。利用臺(tái)盼藍(lán)染色，您可以評(píng)估樣本中活細(xì)胞的百分比?；蛘撸褂?nbsp;Countess 3 FL 系統(tǒng)檢測(cè)熒光染料，進(jìn)行更復(fù)雜的活性分析、檢測(cè)凋亡和細(xì)胞死亡的不同階段、測(cè)量轉(zhuǎn)染效率，以及其他應(yīng)用。

單細(xì)胞數(shù)據(jù)。Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可分析和存儲(chǔ)您樣品中每個(gè)細(xì)胞的數(shù)據(jù)。您可以放大任何細(xì)胞并顯示其大小、亮度、圓度和熒光值。您還可以流式細(xì)胞儀標(biāo)準(zhǔn) (FCS) 格式生成散點(diǎn)圖，并在多種流式細(xì)胞儀軟件分析程序中分析、轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)和重新設(shè)置數(shù)據(jù)格式。

多樣化的細(xì)胞系和細(xì)胞樣品。Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的計(jì)數(shù)算法已在一組不同的細(xì)胞樣本上進(jìn)行了訓(xùn)練，您可以相信Countess 3 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能夠?qū)崿F(xiàn)高準(zhǔn)確度的細(xì)胞計(jì)數(shù)。下表列示了在 Countess 3 和 Countess 3 FL 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上進(jìn)行了測(cè)試和驗(yàn)證的細(xì)胞類型和細(xì)胞系。

兼容可重復(fù)使用計(jì)數(shù)板

兩種 Countess 3 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀均可使用 Invitrogen Countess 可重復(fù)使用計(jì)數(shù)板，可重復(fù)計(jì)數(shù)板可避免一次性計(jì)數(shù)板的浪費(fèi)。即使您的實(shí)驗(yàn)室每天只使用五張計(jì)數(shù)板，通過(guò)使用可重復(fù)使用的計(jì)數(shù)板，可顯著減少每年造成的浪費(fèi)。這使得實(shí)驗(yàn)室能夠負(fù)擔(dān)起細(xì)胞計(jì)數(shù)自動(dòng)化的成本，不會(huì)產(chǎn)生一次性計(jì)數(shù)板的持續(xù)性花費(fèi)。

Invitrogen Countess 細(xì)胞計(jì)數(shù)板一次性計(jì)數(shù)板，無(wú)需像可重復(fù)計(jì)數(shù)板那樣進(jìn)行清潔，然后在細(xì)胞樣品的處理間隔等待其干燥。需要處理大量細(xì)胞樣品，為了減少污染風(fēng)險(xiǎn)或處理有害樣本時(shí)，一次性計(jì)數(shù)板使用方便，可快速處理細(xì)胞樣品。

符合 21 CFR 第 11 部分要求的支持軟件

Countess SAE 軟件解決方案是一個(gè)選配軟件模塊，支持電子記錄保存，符合美國(guó)食品和藥品監(jiān)督管理局（FDA）的“電子記錄和簽名規(guī)則"、“聯(lián)邦法規(guī)"第 21 篇第 11 部分（21 CFR 第 11 部分）的要求。該法規(guī)對(duì)使用電子文件代替紙質(zhì)文件做出了規(guī)定。

21 CFR 第 11 部分合規(guī)性包括規(guī)程要求和技術(shù)要求。

· 規(guī)程要求是最終用戶機(jī)構(gòu)所制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

· 技術(shù)要求是所使用的合規(guī)性管理軟件的功能特征。

僅滿足技術(shù)要求并不能保證 21 CFR 第 11 部分合規(guī)性。合規(guī)性由機(jī)構(gòu)的工作流程和所用系統(tǒng)兩者決定。

軟件的功能包括限制未經(jīng)授權(quán)的用戶、密碼策略和失效日期、定義的用戶權(quán)限和角色、通過(guò)審計(jì)日志、審計(jì)報(bào)告以及機(jī)載電子簽名工作流程跟蹤所有數(shù)據(jù)更改。購(gòu)買 Countess SAE 軟件許可證后，所有 Countess 3 和 Countess 3 FL 全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都可以在 SAE 模式下運(yùn)行。要實(shí)現(xiàn) 21 CFR 第 11 部分合規(guī)性，機(jī)構(gòu)還需要以合規(guī)方式制定和記錄標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

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