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細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳,該如何調(diào)整

閱讀:894      發(fā)布時間:2024-3-6
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細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳,該如何調(diào)整?


細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)差的原因及解決方法,復(fù)蘇時可根據(jù)以下情況及時進(jìn)行調(diào)整。

1. 細(xì)胞凍存不當(dāng)

解決方法:可以嘗試調(diào)整細(xì)胞狀態(tài),加大血清比例,后面再繼續(xù)傳代調(diào)整。


2. 自行制備的凍存細(xì)胞無活性

解決方法:制備凍存細(xì)胞時使用傳代次數(shù)少且處于對數(shù)期的細(xì)胞;提高凍存密度有助于提升復(fù)蘇存活率,推薦密度為100~300萬細(xì)胞/mL。


3. 細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng)

解決方法:復(fù)蘇講究“快融",越快融化,細(xì)胞所受損傷就越小。確保冷凍細(xì)胞解凍迅速,接種前用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。


4. 復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng)

解決方法:確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱,并且盡快移除含有冷凍保護(hù)劑的培養(yǎng)基,防止活力下降。


5. 處理細(xì)胞時動作不夠輕柔

解決方法:凍存和復(fù)蘇過程對大多數(shù)細(xì)胞都會造成不利影響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時除外),也不要高速離心細(xì)胞。


6. 細(xì)胞稀釋過度

解決方法:將解凍后的細(xì)胞高密度接種,以改善復(fù)蘇效果。


7. 凍存液中所用保護(hù)劑在儲存過程中未避光

解決方法:如果未避光儲存,凍存保護(hù)劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷?xì)胞有毒性的物質(zhì);建議新取一只凍存保護(hù)劑,重新凍存細(xì)胞。


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