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ELISA 是一種對(duì)液體溶液中存在的抗原和抗體等蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。將與目標(biāo)抗原和抗體具有相同特異性結(jié)合能力的抗原和抗體制備在平板上，使其相互結(jié)合，最后與酶或染料發(fā)生反應(yīng)，測(cè)量吸收光譜。ELISA 是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) 的縮寫，是一種免疫學(xué)測(cè)定方法。ELISA 利用抗原和抗體的特異性，是一種高精度的定性和定量分析方法。
ELISA試劑盒也已市售，廣泛用于定量分析抗原和抗體。對(duì)于ELISA試劑盒而言，溫度控制通常非常重要，因此必須注意避免因冰箱存放位置不同而產(chǎn)生的 溫差，并防止試劑盒因過冷而凍結(jié)。
根據(jù) ELISA 方法，在進(jìn)行定量分析之前可能還需要很多步驟，但最近已經(jīng)開發(fā)出全自動(dòng)測(cè)量設(shè)備，從而縮短了分析所需的時(shí)間。
ELISA 用途
ELISA 廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。例如，它用于分析血液（例如血漿和血清）中的抗原和抗體。通過采集血液樣本并用 ELISA 測(cè)定自身抗體水平，可以診斷疾病或檢查疫苗接種后的抗體滴度。因此，ELISA 廣泛應(yīng)用于醫(yī)院血液檢測(cè)的分析。近年來，越來越多的疾病通過 ELISA 進(jìn)行研究。
還可以通過采集血液樣本來檢查食物中是否存在過敏原，并確定受試者是否有食物過敏。
使用 DNA 的 PCR 方法已成為檢測(cè)冠狀病毒抗原和抗體的流行方法，但 ELISA 分析試劑盒也可供出售。
ELISA 原理
ELISA 使用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行分析。
首先，將待測(cè)抗原與對(duì)該抗原具有特異性的抗體結(jié)合。為了檢測(cè)結(jié)合的抗體，還需要將標(biāo)記有特定酶的抗體與抗原結(jié)合。
與抗原、抗體、酶結(jié)合的目標(biāo)物質(zhì)，與酶發(fā)生反應(yīng)而變色的底物混合，顏色根據(jù)目標(biāo)物質(zhì)的量而變化，因此用吸光光度計(jì)測(cè)定吸收光譜，進(jìn)行定量、定性分析。
IgG抗體常用于免疫測(cè)定方法，包括ELISA。
ELISA方法
ELISA方法有多種，市面上也有各種類型的試劑盒。我們將介紹 簡(jiǎn)單的直接法。其基本測(cè)定流程與其他方法并無太大區(qū)別。
首先，將與待測(cè)物質(zhì)結(jié)合的抗體吸附到微孔板上。
使用加樣吸量器將定量的液體樣本加入微孔板中。在恒溫箱中控溫，使液體樣本中的抗原和抗體與微孔板上的抗原和抗體發(fā)生反應(yīng)并結(jié)合。然后洗去多余的抗體。
結(jié)合的抗體隨后與特定酶發(fā)生反應(yīng)。為了檢測(cè)酶活性，需要添加一種與酶結(jié)合后吸收光譜會(huì)發(fā)生變化的底物，然后測(cè)量并分析反應(yīng)后的吸收光譜。辣根過氧化物酶 (HRP) 通常用作顯色底物。使用 HRP 時(shí)，必須注意不要使用涂有 作為抑制劑 的采血管，以防止污染。
最后，利用吸光度計(jì)測(cè)量并分析吸收光譜。
ELISA設(shè)備
ELISA通常需要多個(gè)步驟才能根據(jù)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確的分析，每個(gè)步驟都需要反復(fù)分液和清洗。此外，還需要移液器、微孔板、培養(yǎng)箱以及吸光度測(cè)量裝置等設(shè)備。
最近，一種可在一臺(tái)設(shè)備中實(shí)現(xiàn)移液和分光光度分析功能的裝置被開發(fā)出來。由于無需人工干預(yù)即可全自動(dòng)進(jìn)行測(cè)量，因此可以減少錯(cuò)誤并節(jié)省時(shí)間和精力。
