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什么是制備型 HPLC?

2025-1-13  閱讀(693)

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制備型HPLC是可以分離和收集組分的高效液相色譜( HPLC )。

通過對主要成分進行精制可以提高純度,并且可以收集樣品中所含的雜質(zhì)等微量成分。制備型HPLC的原理與普通HPLC分析相同,因此通過選擇合適的色譜柱,可以根據(jù)化合物的各種特征,如化學結(jié)構(gòu)、分子量和3D結(jié)構(gòu)來分離和純化各個組分。

此外,通過改變色譜柱尺寸和設(shè)備配置,制備型 HPLC 可以將獲得的目標產(chǎn)物的量從毫克級改變到公斤級。

制備型 HPLC 的應用

1.化學合成后目標成分的純化

制備型HPLC的一個特點是它可以利用HPLC的高分離能力。如果您可以在 HPLC 上獲得分離的峰,則可以單獨分離每個峰。

在有機化學、生物化學等領(lǐng)域,通過化學合成或生物催化劑合成獲得的樣品除主要成分外,還含有雜質(zhì)、副產(chǎn)物等多種微量成分。使用柱純化和重結(jié)晶等常規(guī)純化方法很難選擇性地僅提取一種成分。另一方面,對于制備型HPLC,如果可以進行HPLC分離,則分離的可能性很高。

2. 通過主成分和雜質(zhì)的制備分離進行副反應分析

在制備型HPLC中,通過HPLC分離的每個峰都可以作為單獨的級分收集,因此可以選擇性地收集高純度的主要成分和雜質(zhì)。例如,在材料行業(yè)中,高純度樣品用于利用制備型HPLC獲得的高純度目標物質(zhì)來評估材料和物理性質(zhì)。

此外,在化學工業(yè)中,通過高純度雜質(zhì)和副產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)分析來分析反應系統(tǒng)中發(fā)生的副反應。

3. 蛋白質(zhì)和聚合物的純化

在生物系統(tǒng)中,制備型 HPLC 通過尺寸排阻色譜 (SEC) 柱進行蛋白質(zhì)純化。在聚合物領(lǐng)域,我們使用SEC柱來純化聚合物,進行分子量分級,并評估各組分的物理性能。

4.天然產(chǎn)物的純化

HPLC 的高分離能力有時用于從含有各種化合物的天然產(chǎn)物樣品中提取目標物質(zhì)。反相柱因其高分離能力而經(jīng)常被使用。

制備型高效液相色譜法原理

制備型 HPLC 的分離機理與分析型 HPLC 類似。與常規(guī)柱純化和重結(jié)晶等其他純化方法不同,制備型 HPLC 的優(yōu)勢在于它可以以與分析幾乎相同的分離能力進行純化。

HPLC柱填充有多孔硅膠或表面經(jīng)過烷基等官能團修飾的硅膠。填充的材料稱為固定相, 常用的是十八烷基(ODS,C18)基團修飾的硅膠。當樣品溶液注入柱中時,樣品的每種成分與固定相相互作用或分配到固定相中。

這種相互作用的強度或分配程度取決于每種組分的物理化學性質(zhì),因此每種組分在通過色譜柱時會分離。 HPLC的原理就是通過這種方式分離各個組分。

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