E.coli殘留DNA檢測試劑盒（qPCR-熒光探針法）是一款基于Taqman探針技術(shù)的科研級檢測工具，專為精準(zhǔn)定量生物制品（如疫苗、基因治療藥物）中的大腸桿菌宿主細(xì)胞DNA殘留而設(shè)計(jì)。該試劑盒結(jié)合高靈敏度熒光定量PCR技術(shù)，檢測限低至3×101fg/μL，支持從中間品到成品的全流程質(zhì)量控制，為生物制藥行業(yè)提供高效、可靠的檢測方案。
- 超高靈敏度：檢測范圍覆蓋3×10?fg/μL至3×10?fg/μL，最i低檢測限達(dá)fg級，滿足嚴(yán)苛質(zhì)控需求。
- 國家標(biāo)準(zhǔn)品配套：采用國家標(biāo)準(zhǔn)的E.coli DNA定量參考品，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性與可溯源性。
- 廣泛儀器兼容性：適配ABI7500、BioRad CFX96、Roche LightCycler 480等主流qPCR儀器（需根據(jù)機(jī)型選擇ROX參比染料）。
- 操作便捷：即用型試劑設(shè)計(jì)，配合前處理試劑盒（貨號HG-CL100），簡化實(shí)驗(yàn)流程。
- 生物制藥生產(chǎn)：監(jiān)測重組蛋白、抗體藥物中宿主DNA殘留，確保成品安全性。
- 基因治療研發(fā)：評估病毒載體或基因編輯產(chǎn)品的純度。
- 科研實(shí)驗(yàn)：用于微生物學(xué)、分子生物學(xué)研究中的DNA定量分析。
檢測原理（采用Taqman探針法）：
1. 探針標(biāo)記：熒光探針與目標(biāo)DNA特異性結(jié)合，PCR擴(kuò)增時(shí)探針?biāo)忉尫艧晒庑盘枴?
2. 實(shí)時(shí)定量：通過熒光強(qiáng)度變化（FAM通道）實(shí)時(shí)監(jiān)測DNA擴(kuò)增，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算殘留量。
1. 樣品前處理：使用配套試劑盒（HG-CL100）提取純化DNA。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：按梯度稀釋國家參考品（ST0-ST5），制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
標(biāo)準(zhǔn)品代號 | 稀釋體積 | 濃度（fg/μL） |
ST0 | 10μL E.coli DNA 定量參考品 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×106 |
ST1 | 10μL ST0 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×105 |
ST2 | 10μL ST1 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×104 |
ST3 | 10μL ST2 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×103 |
ST4 | 10μL ST3 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×102 |
ST5 | 10μL ST4 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×101 |
3. 反應(yīng)體系配置：混合2×qPCR緩沖液、引物探針Mix及適配ROX，加入待測樣本。
4. qPCR程序運(yùn)行：
- 預(yù)變性：95℃ 10分鐘
- 40次循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（熒光采集）
5. 數(shù)據(jù)分析：通過Ct值計(jì)算樣本濃度，驗(yàn)證標(biāo)曲線性（R2>0.98）與加標(biāo)回收率（50%-150%）。
Q：陰性對照（NTC/NCS）出現(xiàn)信號怎么辦？
A：可能是交叉污染或試劑失效，建議更換吸頭、分區(qū)操作，并檢查試劑有效期。
Q：標(biāo)曲擴(kuò)增效率不達(dá)標(biāo)如何處理？
A：優(yōu)化引物探針濃度，確保標(biāo)準(zhǔn)品稀釋準(zhǔn)確，避免反復(fù)凍融。
Q：如何選擇ROX參比染料？
A：參照說明書中的機(jī)型適配表，或聯(lián)系技術(shù)支持獲取定制建議。
- 未開封試劑盒：-20℃保存，有效期18個(gè)月。
- 開封后：避免反復(fù)凍融，ROX染料需嚴(yán)格避光。
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