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ELISPOT（Enzyme-linked Immunospot Assay）全名為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測，結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，能夠檢測到單個(gè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子情況。

ELISPOT 實(shí)驗(yàn)使用 PVDF 膜為底的 96 孔板，包被上特異性的單克隆抗體來捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入待檢測的細(xì)胞和抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng)，在刺激物的刺激下，T細(xì)胞就會(huì)在對(duì)應(yīng)的時(shí)間段分泌對(duì)應(yīng)的細(xì)胞因子。細(xì)胞因子被包被在膜上的抗體所捕獲。洗去細(xì)胞，被捕獲的細(xì)胞因子可以與生物素標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，然后用酶標(biāo)親和素與生物素結(jié)合，進(jìn)行化學(xué)酶聯(lián)顯色，就可以在膜的局部形成一個(gè)個(gè)圓形的斑點(diǎn)，每一個(gè)斑點(diǎn)就對(duì)應(yīng)了當(dāng)初一個(gè)分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)膜上的斑點(diǎn)的數(shù)目，再除以當(dāng)初加入孔內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)，就可以計(jì)算出陽性細(xì)胞的百分比。