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路路通酸-過氧化物酶標記物(Liquidambaric Acid-Peroxidase Conjugate,如HRP標記路路通酸)是一種通過化學交聯(lián)技術將路路通酸與辣根過氧化物酶(HRP)連接形成的復合物,在科研領域具有重要應用價值。以下是關于該標記物的詳細介紹:
結構與組成
路路通酸:由金縷梅科植物楓香樹的干燥成熟果實提取,是一種具有生物活性的天然化合物。
辣根過氧化物酶(HRP):一種廣泛使用的酶標記物,具有催化過氧化物分解的活性,常用于免疫檢測中的信號放大。
化學交聯(lián):通過共價鍵將路路通酸與HRP連接,形成穩(wěn)定復合物,保留兩者的生物活性。
物理化學性質
溶解性:溶于磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 7.4),蛋白濃度≥1 mg/ml,含BSA及甘油等酶穩(wěn)定劑。
穩(wěn)定性:在低溫(-20℃或以下)、干燥、避光條件下穩(wěn)定,避免反復凍融和長時間暴露于不穩(wěn)定環(huán)境。
抗體制備
免疫原性:路路通酸-過氧化物酶標記物可作為抗原免疫動物,誘導產(chǎn)生針對路路通酸的特異性抗體,用于后續(xù)研究或檢測。
科研價值:制備的抗體可用于分析路路通酸的毒性機制、藥物代謝等過程。
免疫檢測
檢測方法:該標記物可用于ELISA等免疫檢測方法,作為檢測信號放大和可視化的工具。
效價:經(jīng)稀釋后可用于ELISA檢測,效價≥1:5000。
應用場景:藥物殘留檢測、藥理實驗、生物標志物分析等。
科研工具
毒性機制研究:通過該標記物探究路路通酸與生物分子的相互作用,揭示其生物活性機制。
藥物開發(fā):作為模型化合物,篩選抑制路路通酸活性的藥物或拮抗劑。
化學交聯(lián)反應
活化處理:將路路通酸進行化學修飾,引入反應性基團(如羧基、氨基)。
偶聯(lián)反應:在適宜條件下(如pH、溫度),使活化后的路路通酸與HRP通過共價鍵連接。
純化與鑒定:通過透析、凝膠過濾等方法純化產(chǎn)物,并使用電泳、光譜分析等技術驗證偶聯(lián)成功。
常用交聯(lián)劑
碳二亞胺法(EDC/NHS):利用EDC和NHS活化羧基,與氨基反應形成酰胺鍵。
戊二醛法:通過醛基與氨基反應,形成交聯(lián)結構。
使用限制
科研專用:路路通酸-過氧化物酶標記物僅供科研實驗使用,嚴禁用于臨床醫(yī)療或其他非科研用途。
操作規(guī)范:使用過程中需佩戴防護設備(如手套、護目鏡),避免直接接觸或吸入。
毒性警示
路路通酸毒性:雖然路路通酸本身毒性較低,但需注意其來源植物的潛在毒性,確保安全使用。
HRP安全性:HRP為生物酶,通常認為安全,但需避免吸入酶粉塵或接觸皮膚。
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