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馬兜鈴酸-過氧化物酶標記物(Aristolochic Acid-Peroxidase Conjugate,簡稱AA-HRP)是一種通過化學交聯(lián)技術(shù)將馬兜鈴酸(特別是馬兜鈴酸I)與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合形成的復合物,以下是對其的詳細介紹:
結(jié)構(gòu)與功能
雙組分結(jié)合:保留馬兜鈴酸的生物活性(如與特定抗體或受體的結(jié)合能力)和HRP的催化特性(如催化過氧化氫分解)。
物理化學性質(zhì):具有高穩(wěn)定性,能在特定條件下(如低溫、避光)保持催化活性和識別能力。
催化特性
酶促反應:HRP部分可催化過氧化氫分解,產(chǎn)生可檢測的信號(如顏色變化或熒光),適用于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)等檢測方法。
高靈敏度:經(jīng)稀釋后效價通?!?:5000,能準確、快速測定樣品中的目標物質(zhì)。
抗體制備
提高特異性:作為標記物用于抗體制備過程,增強抗體對馬兜鈴酸及其代謝產(chǎn)物的識別能力。
靈敏度提升:通過HRP的催化放大效應,降低檢測限,適用于低濃度樣本分析。
免疫檢測
藥物殘留檢測:檢測食品、中藥或生物樣本中的馬兜鈴酸殘留,評估其安全性。
ELISA檢測
操作流程:將AA-HRP與樣本中的目標抗體或抗原結(jié)合,通過底物顯色反應定量分析目標物質(zhì)濃度。
優(yōu)勢:快速、準確、高通量,適用于大規(guī)模篩查。
制備方法
化學交聯(lián):通過共價鍵將馬兜鈴酸I與HRP上的功能基團(如氨基、羧基)連接,形成穩(wěn)定復合物。
條件優(yōu)化:需控制反應溫度、pH值及交聯(lián)劑濃度,以平衡標記效率與酶活性保留。
保存條件
溫度:建議保存于-20℃或以下,避免高溫或低溫導致標記物失活或降解。
光照:需避光保存,防止光照對標記物穩(wěn)定性的影響。
反復凍融:避免反復凍融或長時間置于不穩(wěn)定環(huán)境中,以減少性能損失。
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