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一文讀懂凝膠色譜儀的使用流程
閱讀：1043 發(fā)布時(shí)間：2023-4-24
凝膠色譜儀是一種常用的分離和純化生物大分子的工具，通常用于分離蛋白質(zhì)、核酸和多糖等大分子化合物。下面是凝膠色譜儀的使用流程：
1.制備樣品
首先需要準(zhǔn)備待檢測(cè)的樣品，并將其適當(dāng)稀釋至所需濃度。
2.選擇適當(dāng)?shù)臉?shù)脂柱
不同的樹(shù)脂柱對(duì)應(yīng)著不同的分子大小范圍，因此需要根據(jù)待檢測(cè)樣品的大小選擇適當(dāng)?shù)臉?shù)脂柱。例如，對(duì)于較小的蛋白質(zhì)可以選擇分子量截止為10 kDa的Sephadex G-25柱。
3.裝載樣品
將已經(jīng)稀釋好的待測(cè)樣品緩慢注入到樹(shù)脂柱中，注意不能超過(guò)柱容積，避免壓力過(guò)大。
4.收集洗脫液
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇合適的洗脫液進(jìn)行洗脫。通常情況下，可以利用PBS或者甘氨酸鹽緩沖溶液進(jìn)行洗脫，然后通過(guò)紫外吸收法或其他檢測(cè)手段監(jiān)測(cè)洗脫出來(lái)的目標(biāo)分子。
5.數(shù)據(jù)分析
根據(jù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，如計(jì)算目標(biāo)分子在樣品中的濃度或者分子量等。
6.清洗和保存
實(shí)驗(yàn)后需要對(duì)凝膠色譜儀進(jìn)行清洗，以避免污染。清洗方法可以根據(jù)不同的樹(shù)脂柱和洗脫液選擇不同的清洗液。最后將凝膠色譜儀放置在干燥、陰涼處保存，以便下次使用。