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使用蛋白 A/G 磁珠進行抗體純化的步驟與技巧

閱讀：638 發(fā)布時間：2024-11-4

　　蛋白 A/G 磁珠是一種常用的抗體純化工具，其通過特異性結(jié)合抗體的Fc段，實現(xiàn)對目標(biāo)抗體的高效富集和純化。

　　一、準備工作

　　材料準備

　　蛋白 A/G 磁珠

　　待純化的抗體樣品

　　緩沖液

　　磁力架

　　離心管

　　磁珠預(yù)處理

　　根據(jù)磁珠的使用說明，進行必要的預(yù)處理。

　　二、純化步驟

　　抗體樣品準備

　　將待純化的抗體樣品置于合適的離心管中。

　　磁珠結(jié)合

　　將適量的蛋白 A/G 磁珠加入抗體樣品中，輕輕混勻。

　　在室溫下緩慢旋轉(zhuǎn)或振蕩一定時間，使抗體與磁珠充分結(jié)合。

　　磁分離

　　將離心管放置在磁力架上，靜置一段時間，使磁珠聚集在磁場邊緣。

　　去除上清液，保留磁珠與抗體的復(fù)合物。

　　洗滌

　　加入適量的洗滌緩沖液，輕輕混勻后再次進行磁分離。

　　重復(fù)洗滌步驟數(shù)次，以去除未結(jié)合的雜質(zhì)。

　　抗體洗脫

　　加入適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（通常為低pH緩沖液），輕輕混勻。

　　室溫下靜置一段時間后，再次進行磁分離。

　　收集上清液，即為純化的抗體。

　　三、技巧與注意事項

　　控制結(jié)合時間

　　結(jié)合時間過短可能導(dǎo)致抗體結(jié)合不全，過長則可能影響抗體活性。需根據(jù)實際情況調(diào)整。

　　選擇合適的緩沖液

　　不同的抗體可能對緩沖液的要求不同，需根據(jù)抗體的性質(zhì)選擇合適的緩沖液。

　　洗滌

　　洗滌步驟要完整，以確保去除雜質(zhì)，但也要避免過度洗滌導(dǎo)致抗體損失。

　　注意pH值

　　洗脫緩沖液的pH值要適當(dāng)，過低可能導(dǎo)致抗體變性，過高則可能導(dǎo)致洗脫效果不佳。

　　避免污染

　　在整個操作過程中，要注意無菌操作，避免交叉污染。

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