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中級(jí)會(huì)員 | 第4年

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ELISA試劑盒操作步驟知多少？

時(shí)間：2023/6/29閱讀：1366
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　　操作步驟
　?。ㄒ唬悠窚?zhǔn)備
　　1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。
　　2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋?zhuān)ㄈ?μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
　　3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
　?。ǘz驗(yàn)方法
　　1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
　　2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
　　3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
　　4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
　　5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
　　6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。
　　7.洗滌，同步驟5。
　　8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
　　9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。

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