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精漿輔酶Q10水平檢測方法
輔酶Q10又稱泛醌，是一種重要的脂溶性物質(zhì)，存在于以人類為主的動、植物線粒體的內(nèi)膜中，在呼吸鏈中起著傳遞氫體作用。它對許多酶具有激活作用，并能增加機體的免疫力。Co Q10同時也是機體內(nèi)一種重要的抗氧化物質(zhì)，具有天然的抗自由基氧化，防止細胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、保持膜流動性的功能。正是由于Co Q10的這種抗氧化特性，使其愈來愈引起人們的關(guān)注，臨床應(yīng)用范圍不斷得到擴大。
測定Co Q10的方法已有文獻報道，其中主要采取分光光度法。這些方法的靈敏度和特異性都不夠理想。一般難于應(yīng)用于生物樣品中微量Co Q10的測定。近年液相色譜分析方法已開始應(yīng)用于血漿生物樣品中Co Q10含量測定。
可以輔酶Q9為內(nèi)標(biāo)，建立了一種液相色譜內(nèi)標(biāo)法用于測定精漿中Co Q10含量。步驟簡便，準確性、特異性較好。應(yīng)用本法研究正常生育男子和不育癥患者精漿中Co Q10含量差異，并對測定結(jié)果進行了統(tǒng)計學(xué)分析。
方法色譜條件：流動相：異丙醇：甲醇；四氫呋喃（55：39：6），使用前以0.45µm膜減壓過濾。檢測波長：275nm。流速：1.0ml/min。定量管體積20µL。
樣品測定：于避光處移取精漿1.0mL置于10mL具塞尖底離心管中，加入60µLCo Q9內(nèi)標(biāo)溶液（5mg/L），搖勻。加入2ml甲醇，加蓋渦漩混合30s沉淀蛋白后加入5mL正己烷，渦漩混合提取5min，離心（3000r/min;5min）。取正己烷層4ml移至安瓿，45℃下以氮氣流吹干。殘渣加100 µL異丙醇充分溶解后，按上述色譜條件進樣測定。