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血清鐵濃度檢測試劑盒說明書

                                                 微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

血清鐵是指血液中轉鐵蛋白所結合的鐵，該指標常用于鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血。

測定原理：

亞硫酸鈉還原血清Fe³⁺生成成Fe²⁺，Fe²⁺進一步與2, 2’- 聯(lián)吡啶顯色，在520nm處有吸收峰，測定該波長光吸收值即可計算血清鐵含量。

自備儀器和用品：

離心機、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、冰醋酸、氯仿和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，加入15 mL蒸餾水充分溶解。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，加入469μL冰醋酸，加入15 mL蒸餾水充分溶解。

標準液：液體1mL×1支（EP管），100 μmol/L Fe³⁺標準液，4℃保存。

測定：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節(jié)波長到520 nm，蒸餾水調零。

2. 標準液解凍：提前取出標準液，置于室溫下充分解凍后混勻。

3. 空白管：取EP管，依次加入125 μL蒸餾水，125 μL試劑一，125 μL試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來水冷卻。加入62 μL氯仿（自備），充分震蕩混勻；室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層液210 μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，依次加入125 μL標準液，125 μL試劑一，125 μL試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來水冷卻。加入62 μL氯仿，充分震蕩混勻；室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層液210 μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520 nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 測定管：取EP管，依次加入125 μL血清，125 μL試劑一，125 μL試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來水冷卻。加入62 μL氯仿，充分震蕩混勻；室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層液210 μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

血清鐵濃度計算公式：

血清鐵含量(μmol /dL)=[C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總

=10 × (A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)

C標準液：100 μmol/L Fe³⁺標準液；V總：標準液總體積1mL；1 dL=0.1 L。

注意事項：

1、血清鐵含量少，所用器皿（EP管）需要注意，避免被鐵污染。

2、試劑一和試劑二溶液不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用，新配制的試劑只能當天使用。

3. Z低檢出限為1μmol/L。

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