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細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的用途以及細(xì)胞培養(yǎng)需要注意的外在因素
細(xì)胞計(jì)數(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)研究中的一項(xiàng)基本研究，它是了解培養(yǎng)細(xì)胞生長狀態(tài)，測定培養(yǎng)基、血清和藥物等物質(zhì)生物作用的重要手段。自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器能夠在1min以內(nèi)對培養(yǎng)的細(xì)胞分析，并獲得細(xì)胞活細(xì)胞和死細(xì)胞濃度、細(xì)胞平均體積大小、生存能力、細(xì)胞大小或體積分布曲線圖。自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器還有用于藻類，微生物等直徑細(xì)胞計(jì)數(shù)器范圍內(nèi)的生物。相對血球計(jì)數(shù)板法，細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)更加精確，快速便捷，誤差更小。
二：儀器在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用：
測定不同時(shí)間段的培養(yǎng)液中細(xì)胞的濃度，繪制細(xì)胞的生長曲線，確定細(xì)胞的倍增時(shí)間。這是細(xì)胞培養(yǎng)過程中必要的一項(xiàng)研究。細(xì)胞的生長包括滯留期，指數(shù)生長期（對數(shù)期），平臺期（生長停止期）如下圖。不同的生長時(shí)期細(xì)胞內(nèi)的代謝途徑是不同的。
細(xì)胞生長曲線示意圖
三：細(xì)胞計(jì)數(shù)。在測定胞內(nèi)外代謝物的時(shí)，可以知道每個(gè)細(xì)胞的胞內(nèi)外代謝物的情況，避免了在平行實(shí)驗(yàn)或者是對照實(shí)驗(yàn)中由于細(xì)胞數(shù)量不同而造成的誤差。
四：細(xì)胞存活率。細(xì)胞的存活率可以用于細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，藥物處理實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)中。
五：獲得細(xì)胞體積直方圖可以得到用來區(qū)別細(xì)胞的形態(tài)。
那么細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)防止收到外界影響需要注意什么？
1.無菌環(huán)境
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長繁殖，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。
2.合適的溫度
一般哺乳類與禽類細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃，不適宜的環(huán)境溫度會影響細(xì)胞的生長。細(xì)胞對低溫的耐受能力要強(qiáng)于對高溫的耐受能力，在低溫下，細(xì)胞的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃，雖然細(xì)胞代謝受到影響，但無損傷作用;25～35℃時(shí)，細(xì)胞以緩慢的速度生長;但若被置于40℃數(shù)小時(shí)，則不僅不利于細(xì)胞生存、生長，甚至可導(dǎo)致其死亡。
3.適宜的滲透壓
高滲溶液或低滲溶液會引起細(xì)胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對滲透壓都有一定的耐受能力，實(shí)際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞。
4.氣體環(huán)境與pH
細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量;二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。