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植物原生質(zhì)體的制備

時間:2023/1/29閱讀:1866
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原理

去掉植物細胞壁的方法可以是機械的人工操作,也可以利用酶解法。較早利用機械法制備原生質(zhì)體的首-推Klercker(1892),直到1960 年英國科學家Cocking 才第一次用酶法大量制備原生質(zhì)體。本實驗以植物的葉肉組織為材料,利用纖維素酶和果膠酶來消化細胞壁,分離細胞。

材料與儀器

油菜或菠菜或煙草
氯化鈣 蒸餾水 2蔗糖 酶解液
顯微鏡 離心機 離心管 剪刀 鑷子 吸管 培養(yǎng)皿 載玻片 蓋玻片

步驟

1、取材 根據(jù)實驗目的和條件選取不同的材料

 

2、分離原生質(zhì)體

 

(1) 撕葉下表皮

 

(2)酶解 將撕去下表皮的葉片剪成小塊,放在盛有5mL 酶液的小培養(yǎng)皿中,讓去除下表皮的一面接觸酶液,輔滿一層,在25——28℃下酶解60——90 分鐘

 

3、收集純化

 

(1)用吸管將酶解液吸至5mL 離心管中,以600rpm 離心5 分鐘以上,使原生質(zhì)體沉降

 

(2)將上清(酶解液)回收,剩下原生質(zhì)體及殘渣于管底

 

(3)加氯化鈣液約2mL,輕輕吹打均勻

 

(4)用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL,出現(xiàn)下部蔗糖液,上部原生質(zhì)體懸浮液

 

(5)以600rpm 離心10 分鐘,在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶,便是純凈的原生質(zhì)體

 

4、觀察或培養(yǎng)

 

取少許原生質(zhì)體于載片上,蓋片觀察其形態(tài),或者將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),再生植株。

注意事項

要培養(yǎng)懸浮細胞系需較長時間。因此,應著重改善培養(yǎng)條件,主要包括選用合適 的培養(yǎng)基 包括培養(yǎng)基 種類 、添加物 、激素種類及水平等 及培養(yǎng)方式 根 據(jù)培養(yǎng)物狀態(tài)適時改換適宜培養(yǎng)基 選擇合適的外植體及誘導時期 。

常見問題

原生質(zhì)體是裸露的、具有生命活性的細胞,體內(nèi)包裹著細胞核、細胞器、細胞質(zhì)等, 因此原生質(zhì)體具有再生細胞壁、進行連續(xù)分裂并生成完整植株的能力 , 即具有細胞全*性。原生質(zhì) 體能 攝 人 如 DNA、質(zhì)粒 、病毒 、細菌 、細胞器等外源物質(zhì) , 是植物細胞工程進行遺傳操作 、基因轉(zhuǎn)移的良好材料 。

 

以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊

 

安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務,努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。

 

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