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細(xì)胞學(xué)堂 | 手把手教你培養(yǎng)SV-HUC-1
SV-HUC-1 (人輸尿管上皮永生化細(xì)胞)，是由猿猴空泡病毒40轉(zhuǎn)染至1名11歲男孩的泌尿道上皮細(xì)胞，而建立起來的永生化細(xì)胞系。其分化特性與正常細(xì)胞相似，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，可無限傳代，卻不屬于腫瘤細(xì)胞[1]。
基礎(chǔ)信息
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生長(zhǎng)培養(yǎng)基：
Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S
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生長(zhǎng)特性：貼壁，上皮細(xì)胞樣
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推薦傳代比例：1:2-1:4
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推薦換液頻率：2~3次/周
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培養(yǎng)條件：
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
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凍存條件：
55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
SV-HUC-1細(xì)胞正常生長(zhǎng)
細(xì)胞傳代
01
從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄；
02
用PBS沖洗細(xì)胞（每10cm2培養(yǎng)表面積約2mL 溶液）。從與貼壁細(xì)胞層相對(duì)的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動(dòng)細(xì)胞層，前后輕柔搖晃容器數(shù)次；
03
從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入0.25%胰酶（試劑量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層）；
04
輕輕搖晃容器，使試劑*覆蓋細(xì)胞層，T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶留 200μL左右即可；
05
將培養(yǎng)容器放在培養(yǎng)箱中孵育5分鐘左右，在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況；
06
當(dāng)細(xì)胞解離程度≥ 90%時(shí)，傾斜培養(yǎng)容器，使細(xì)胞上液體盡快流盡，加入所用胰酶兩倍體積的*培養(yǎng)基，吹打細(xì)胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；
07
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無菌離心管中，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘；
08
用最少體積的*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液按照推薦比例稀釋，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，再將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱。
注意事項(xiàng)
1、待細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；
2、該細(xì)胞較難消化，注意延長(zhǎng)消化時(shí)間。待消化到細(xì)胞收縮變圓，輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊，細(xì)胞可以滑落方可終止消化；
3、如果使用培養(yǎng)瓶，在將其放入培養(yǎng)箱前，應(yīng)將瓶蓋旋松，以便進(jìn)行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋。
●參考文獻(xiàn)●
[1] 王惠惠, 陳鋒, 朱佳玉, 席淑華, 孫貴范. 亞砷-酸鈉對(duì)SV-HUC-1細(xì)胞NRF2通路影響[J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生, 2017, 33(1): 95-97.