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細(xì)胞學(xué)堂 | 間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的鑒定方法
間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細(xì)胞，存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。在不同的誘導(dǎo)條件下，可以向除造血干細(xì)胞以外的，骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化。間充質(zhì)干細(xì)胞的易獲得、易擴(kuò)增、多潛能等特性使其在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用前景十分光明。
對(duì)于體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定，通?？梢愿鶕?jù)以下三條標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證。
01
細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
可運(yùn)用組織塊貼壁法、酶消化法以及兩種方法的結(jié)合分離出MSC，通過(guò)傳代培養(yǎng)后，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。幾乎所有的MSC都是貼壁生長(zhǎng)，具有較強(qiáng)的貼壁能力。MSC多數(shù)呈纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)，少量呈梭形或不規(guī)則三角形。
02
表面標(biāo)志物鑒定
可采用流式細(xì)胞儀對(duì)MSC的細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定，MSC屬混雜細(xì)胞群，其表面抗原也具有非專一性, 它可同時(shí)表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和表皮細(xì)胞的表面標(biāo)志，如粘附因子、生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子受體以及整合素家族等。
MSC的細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定標(biāo)準(zhǔn)為：CD105、CD73和CD90的陽(yáng)性率≥90%；而CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR呈陰性，陽(yáng)性率≤5%。（如下圖）
流式細(xì)胞儀檢測(cè) hUC-MSC 的表面標(biāo)志物
需要注意的是，陽(yáng)性標(biāo)記不具特異性，并非每個(gè)細(xì)胞都同時(shí)表達(dá)CD105、CD73和CD90。
03
多向分化潛能鑒定
MSC具有分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的能力，可通過(guò)特異性染色鑒定體外成脂、成骨和成軟骨誘導(dǎo)后的分化能力。
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成脂誘導(dǎo)分化鑒定
細(xì)胞成脂分化誘導(dǎo)2周左右，于倒置顯微鏡下觀察，可見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)油滴，經(jīng)油紅O染色后為紅色。
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成骨誘導(dǎo)分化鑒定
細(xì)胞成骨分化誘導(dǎo)3周左右時(shí)，于倒置顯微鏡下觀察，可見不透明區(qū)域，經(jīng)茜素紅染色后可見密集的紅色沉淀物呈結(jié)節(jié)狀。
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成軟骨誘導(dǎo)分化鑒定
細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)2周左右，于倒置顯微鏡下觀察，可見細(xì)胞經(jīng)阿利新藍(lán)染色為淡藍(lán)色。
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參考文獻(xiàn)