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如何培養(yǎng)原代小鼠骨髓間充質干細胞？
小鼠骨髓基質系統(tǒng)內存在的小鼠骨髓間充質干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。那么它是如何培育的呢？
1、材料
成年小鼠4只、胎牛血清、L-DMEM、胰蛋白酶、PBS、Percool細胞分離液、雙抗、8%碳酸氫鈉溶液。
2、儀器
倒置顯微鏡、CO2恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、生物顯微鏡、低溫高速離心機、無菌操作臺、血球計數(shù)板、6孔培養(yǎng)板。
3、方法
骨髓收集→Percoll密度梯度離心法分離純化骨髓間充質干細胞→貼壁培養(yǎng)→形態(tài)學觀察→原代培養(yǎng)細胞
注：原代培養(yǎng)時胎牛血清比例可適當提升，可以提高細胞成活率。
4、結果
?。?）骨髓間充質細胞的形態(tài)學觀察
24h后就見有細胞貼壁，多數(shù)細胞呈圓形。72h后半量換液去除未貼壁細胞，此時貼壁的細胞為單個，形態(tài)大部分為圓形。第一次換液后5~7天可見由幾十個到數(shù)百個細胞組成的集落，細胞形態(tài)呈梭形、三角形、星形。原代培養(yǎng)10天左右，細胞快速增殖，每個集落中的細胞不斷增殖呈長梭形放射狀排列。培養(yǎng)2周左右，每個小集落形成約數(shù)百至上千個細胞的大集落，集落交界處出現(xiàn)重疊、融合。
?。?）骨髓間充質細胞的生長曲線
生長曲線表明BMSCs的增殖能力很強，所測細胞在開始的前4天里生長緩慢處于潛伏適應期，第5天開始迅速增長進入對數(shù)生長期，到第9天細胞數(shù)輕度上升，第10天達到頂點，生長速度減緩進入平臺期。