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大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞處理方法

時間:2022-4-8 閱讀:176
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大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時細(xì)胞密度,細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理。

一.大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞貼壁細(xì)胞
  客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
  肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
  顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
  嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
  將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
  用PBS2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
  1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。

二.大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞懸浮細(xì)胞
  1.接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
  2.肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
  3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
  4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
  5.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)

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