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PriCells: 體外三維基質(zhì)中原代CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增

時(shí)間:2021-10-29 閱讀:279
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PriCells: 體外三維基質(zhì)中原代CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增                             


試劑和材料:
1. 培養(yǎng)基:含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的IMDM,添加1%牛血清白蛋白,10μg/ml胰島素,0.1mmol/L 2-巰基乙醇,50U/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素;
2. 48孔培養(yǎng)板;
3. 0.05%胰蛋白酶,含EDTA;
4. 纖維粘連蛋白(fibronectin)包被的細(xì)胞基質(zhì)支架;
5. 細(xì)胞因子(干細(xì)胞因子,IL-6,IL-3,F(xiàn)lt-3配體);


實(shí)驗(yàn)方法:
1. 用含細(xì)胞因子的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞(100ng/ml干細(xì)胞因子,20ng/ml IL-6,20ng/ml IL-3和100ng/ml Flt-3配體);
2. 將2.5×105 CD34+細(xì)胞/ml接種到纖維粘連蛋白包被的48孔培養(yǎng)板;
3. 每周兩次半量更換新鮮培養(yǎng)基;
4. 兩周后收集細(xì)胞;
 (1)250g離心10min,從三維細(xì)胞基質(zhì)支架中收集非貼壁的細(xì)胞;
 (2)貼壁的細(xì)胞用0.05%胰蛋白酶/EDTA孵育細(xì)胞基質(zhì),37℃孵育30min,隨后250g離心10min;

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