PriCells：動(dòng)物氣管和支氣管假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 大鼠或兔的氣管和支氣管

2. 0.1%中性蛋白酶或0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA混合消化液

3. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS（pH 7.4），含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.4

4. 解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

5. 一次性注射器（1ml或5ml）

6. 200目不銹鋼網(wǎng)篩

7. 離心管（15ml、50ml）

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 在無(wú)菌條件下取氣管或支氣管，用PBS反復(fù)沖洗，以除去血液和粘液。

2. 將氣管或支氣管的一端結(jié)扎，另一端插套管并固定。用注射器經(jīng)套管注入1%中性蛋白酶，至氣管充盈為止。將氣管浸泡于PBS中，在37℃條件下消化20min。

3. 用注射器抽取培養(yǎng)液，將注射器插入套管，反復(fù)沖洗，以分離氣管上皮細(xì)胞。然后，將氣管或支氣管游離端的結(jié)扎線剪斷，回收管腔內(nèi)的細(xì)胞懸液。

4. 用200目不銹鋼網(wǎng)篩過(guò)濾，將濾液離心（1000r/min，10min）。棄上清液后，再用培養(yǎng)液洗滌離心1次。

5. 用培養(yǎng)液懸浮沉淀細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至5×106個(gè)/ml，接種于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板，放入37℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

6. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

7. PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑。

8. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒。

9. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒。