5
當前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術(shù)文章>>PriCells: 人或動物腦毛細血管原代內(nèi)皮細胞的分離
PriCells: 人或動物腦毛細血管原代內(nèi)皮細胞的分離
PriCells: 人或動物腦毛細血管原代內(nèi)皮細胞的分離
實驗材料：
1. 人或動物的腦部毛細血管
2. PBS，含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml
3. 10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶
4. 250g/L BSA
5. 眼科剪，眼科鑷
6. 60μm尼龍篩、150μm尼龍篩和230μm尼龍篩
7. 離心管（15ml、50ml）
實驗方法：
1. 麻醉動物后取其腦組織，將腦組織放入盛有PBS的容器內(nèi)，去除腦膜和表面血管，取皮質(zhì)灰質(zhì)，用勻漿機將其制成勻漿。
2. 用10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶溶液，37℃，消化腦組織1h。吸去上清，將沉淀懸浮于250g/L BSA的PBS中，4000r/min離心10min，去除懸浮的脂肪細胞碎片和髓磷脂。
3. 將沉淀物重新懸浮于上述消化液中，37℃消化1-3h。消化產(chǎn)物先過230μm尼龍篩，再過150μm尼龍篩，以去除大血管、細胞碎片等。
4. 收集微血管。將濾過液通過60μm尼龍篩，以便收集微血管內(nèi)皮細胞。將篩子倒轉(zhuǎn)，用培養(yǎng)液將微血管內(nèi)皮細胞沖洗至平皿中。
5. PriCells-原代內(nèi)皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
6. PriCells-原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)特制添加劑
7. PriCells-原代細胞分離試劑盒