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細胞培養(yǎng) + ELISA的結合產(chǎn)物：ELISPOT技術
ELISPOT（Enzyme-Linked Immunosorbent SPOT, 酶聯(lián)免疫斑點法）：是一種體外檢測特異性抗體分泌細胞和細胞因子分泌細胞的固相酶聯(lián)免疫斑點技術，是ELISA技術和細胞培養(yǎng)技術結合而發(fā)展的新型技術。使體外檢測各種細胞產(chǎn)生細胞因子及細胞分泌抗體研究有了新的突破
ELISPOT技術優(yōu)點：
1. 特異性和敏感性高：能從 20萬-30萬 細胞中檢出 1個 分泌該蛋白的細胞。
2. 顯色反應：顯現(xiàn)清晰可辨的斑點可直接在顯微鏡下人工計數(shù)斑點或通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù)，1個斑點代表1個細胞，從而計算出分泌該蛋白的細胞的頻率。
3. 某些研究不僅要測細胞因子生成量，還需檢測分泌此細胞因子的細胞頻率。
4. 基本方法與ELISA相似。
ELISPOT技術應用：
1. 疫苗研究
2. 自身免疫病研究
3. 腫瘤研究
4. 移植中排斥反應的預測
5. 感染和免疫反應研究
6. 抗原決定簇圖譜分析
7. 化合物和藥物免疫學反應的篩選
ELISPOT技術基本原理
1. Coated Captured Ab in the plates
2. Added stimulated or unstimulated cells in the plates
3. Cytokines or Ab bound to plates
4. Detected Ab with enzyme
5. Counted spots with automated ELISpot reader systems or manually, using a stereomicroscope
References
Czerkinsky et al., A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells. J Immunol Methods 1983; 65: 109.
Asai et al., Evaluation of the modified ELISPOT assay for gamma interferon production in cancer patients receiving antitumor vaccines. Clin Diagn Lab Immunol 2000: 7: 145.
Vasan et al., Phase 1 Safety and Immunogenicity Evaluation of ADMVA, a Multigenic, Modified Vaccinia Ankara-HIV-1 B'/C Candidate Vaccine. PLoS One. 2010; 5: e8816.