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原代細胞無血清培養(yǎng)技術(shù)
1、棄去培養(yǎng)基廢液。
2、消化：加入1ml 0.125％胰酶溶液，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶使酶液浸沒瓶底，溫浴消化2-3分鐘。
3、終止：用無血清培養(yǎng)基終止酶反應(yīng)。
4、離心：收集中和了的培養(yǎng)液，于15ml 的離心管中 1000rmp 離心10分鐘。
5、細胞重懸：棄去上清，加入1ml 無血清培養(yǎng)基用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液。
6、細胞計數(shù)：血球計數(shù)板計數(shù)細胞，并換算出細胞數(shù)量。
7、接種分瓶： 將細胞接種到含4ml無血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
8、鏡檢觀察：次日觀察貼壁率，細胞形態(tài)等。