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慢病毒載體下游純化工藝(一)

時間:2023-5-22 閱讀:1757
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慢病毒載體 (LV) 可以穩(wěn)定地整合到分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞的基因組中,因此在基因和細(xì)胞治療的應(yīng)用越來越廣泛。在過去的幾十年里,慢病毒載體的生產(chǎn)和純化工藝發(fā)展迅速,行業(yè)對慢病毒載體滴度量和純度都有更高的要求,刺激著行業(yè)開發(fā)新材料或采用優(yōu)化慢病毒載體的策略,來滿足市場對慢病毒載體經(jīng)濟(jì)效益的要求。即使慢病毒載體的培養(yǎng)方式正在向懸浮培養(yǎng)遷移,但是目前大多數(shù)大規(guī)模培養(yǎng)仍然是貼壁細(xì)胞培養(yǎng)。其純化策略主要層析純化技術(shù)和膜過濾技術(shù)。

目前行業(yè)中也有一些新開發(fā)的解決方案來改進(jìn)或替代目前的生產(chǎn)方案,以滿足慢病毒載體日益增長的臨床應(yīng)用需求。

慢病毒載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒科的包膜病毒成員,由于它在分裂和非分裂細(xì)胞都具有將外來基因穩(wěn)定地整合到宿主細(xì)胞基因組中并穩(wěn)定表達(dá)的特性,因此可以被生物制藥作為載體利用。此外,它們的整合模式似乎比γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體風(fēng)險(xiǎn)小,因此它們被功能基因組學(xué)、細(xì)胞工程研究,以及重組蛋白生產(chǎn)和臨床基因治療等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

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慢病毒下游工藝純化難點(diǎn):目前的生產(chǎn)技術(shù)所獲得的病毒滴度大概在 1.0E6-1.0E8TU/mL這個范圍內(nèi),其低滴度主要是與生產(chǎn)系統(tǒng)、慢病毒假型特性、收獲條件,甚至是滴定技術(shù)有關(guān)。雜質(zhì)會隨著生產(chǎn)系統(tǒng)的不同而隨之變化的。例如,貼壁細(xì)胞培養(yǎng)慢病毒就會有血清雜質(zhì),質(zhì)粒DNA雜質(zhì)會出現(xiàn)在瞬時轉(zhuǎn)染過程當(dāng)中。因此在下游純化階段,需要根據(jù)不同的應(yīng)用需求調(diào)整慢病毒載體的濃度和純度。在臨床上,病毒載體的濃度和純度需要考慮到藥物安全性、需要降低其致瘤潛能和細(xì)胞毒性。對于體內(nèi)臨床應(yīng)用,需要保證每個患者劑量在1.0E11- 1.0E12TU/mL,同時盡量減少產(chǎn)生免疫反應(yīng)。 在下游純化工藝還需要考慮到慢病毒顆粒本身的不穩(wěn)定性。它會受溫度、離子強(qiáng)度、pH和剪應(yīng)力等環(huán)境因素的影響。

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本文節(jié)選、翻譯自以下參考文獻(xiàn),由于水平有限,詳細(xì)內(nèi)容,請參考原文。本文旨在知識、信息分享,如有任何問題,請私信聯(lián)系。

參考文獻(xiàn):A.S.Moreira, D.G.Cavaco, T.Q.Faria, et al., Advances in Lentivirus Purification.Biotechnology Journal, 2020, 


想了解更多關(guān)于慢病毒載體下游純化工藝的相關(guān)資訊,請關(guān)注下一期“慢病毒載體下游純化工藝(二)"的文章。


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