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細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識分享

時間:2022-11-30 閱讀:1322
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  細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)又稱單細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù),即在體外將一個細(xì)胞從細(xì)胞群中分離出來,使其能夠復(fù)制成一個新的細(xì)胞群培養(yǎng)體系。由單個細(xì)胞形成的細(xì)胞群稱為克隆,純化后的細(xì)胞群稱為細(xì)胞系,即細(xì)胞培養(yǎng)。
 
  各細(xì)胞的遺傳和生物學(xué)特性非常相似和一致,有利于不同細(xì)胞群形態(tài)和功能的比較研究。
 
  菌落(克隆)計數(shù):在倒置顯微鏡下觀察、計數(shù)直徑大于75μm或含有50個以上細(xì)胞的克隆。
 
  血細(xì)胞計數(shù)板細(xì)胞數(shù)/ml=4個大正方形細(xì)胞總數(shù)/4×104
 
  細(xì)胞計數(shù)器/細(xì)胞分析儀(凱西,德國)
 
  細(xì)胞活力0.4%臺盼藍(lán)染色
 
  MTT法可用于評價細(xì)胞的相對數(shù)量和活性
 
  細(xì)胞的冷凍保存和復(fù)蘇:
 
  低溫保存:4℃緩慢冷凍60分鐘(可延長)
 
  -20℃下40-60分鐘(不能太長,可以跳過*)
 
  -80℃(半年內(nèi)轉(zhuǎn)液氮/過夜)程控冷卻儀表1-3℃/min轉(zhuǎn)液氮
 
  復(fù)蘇:38℃溶解,注意水面不能接觸凍存管蓋邊
 
  上清液以低速(500轉(zhuǎn)/分)離心除去,加入相同的培養(yǎng)基,輕輕吹掃上清液,接種于適當(dāng)大小的培養(yǎng)瓶中。

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