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　　流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞實驗步驟：
 

　　1. 細(xì)胞收集：懸浮細(xì)胞直接收集到10ml的離心管中，每樣本細(xì)胞數(shù)為(1~5)×106，/mL　500~1000r/min離心5min，棄去培養(yǎng)液。
 

　　2. 用孵育緩沖液洗滌1次，500~1000r/min離心5min。
 

　　3. 用100ul的標(biāo)記溶液重懸細(xì)胞，室溫下避光孵育10~15min。
 

　　4. 500~1000r/min離心5min沉淀細(xì)胞孵育緩沖液洗1次。
 

　　5. 加入熒光(SA-FLOUS)溶液4℃下孵育20min，避光并不時振動。
 

　　6. 流式細(xì)胞儀分析：流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長用488nm，用一波長為515nm的通帶濾器檢測FITC熒光，另一波長大于560nm的濾器檢測PI。
 

　　7. 結(jié)果判斷：凋亡細(xì)胞對所有用于細(xì)胞活性鑒定的染料如PI有抗染性，壞死細(xì)胞則不能。細(xì)胞膜有損傷的細(xì)胞的DNA可被PI著染產(chǎn)生紅色熒光，而細(xì)胞膜保持完好的細(xì)胞則不會有紅色熒光產(chǎn)生。因此，在細(xì)胞凋亡的早期PI不會著染而沒有紅色熒光信號。正?；罴?xì)胞與此相似。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點圖上，左下象限顯示活細(xì)胞，為(FITC-/PI-)；右上象限是非活細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，為(FITC+/PI+)；而右下象限為凋亡細(xì)胞，顯現(xiàn)(FITC+/PI-)。