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細胞免疫熒光步驟

閱讀：1141        發(fā)布時間：2021-4-25

細胞免疫熒光步驟

 

實驗方法原理

在進行細胞免疫熒光過程中，需要用到細胞爬片，通過將爬片浸在細胞培養(yǎng)基內(nèi)，細胞在爬片上生長，進而進行細胞的免疫熒光。
實驗材料
試劑、試劑盒
儀器、耗材
實驗步驟細胞爬片免疫熒光實驗步驟

第一天：

1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min；

5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜；

第二天：

6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

7. 復(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5min，對標本進行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。
注意事項

1.取細胞爬片時，動作應(yīng)輕柔，防止將細胞爬片夾碎，影響實驗進程。

 

2.種細胞過程中，要注意將細胞輕柔混勻，“八”字或者“十”字形搖晃，防止細胞局部生長過密。

 

 

 

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