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液相色譜柱的柱長及內(nèi)徑的選擇
閱讀：1710 發(fā)布時(shí)間：2020-11-25
液相色譜柱在使用前，要進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為評價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時(shí)要按照出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
液相色譜柱的柱長及內(nèi)徑的選擇：
長度的選擇：柱越長，總柱效越高(n值越大)，柱越長，分析時(shí)間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物；500—600mm，要求較高分辨率的應(yīng)用，—般用來分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。
內(nèi)徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內(nèi)徑越小柱效越高，但內(nèi)徑越大，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多。當(dāng)進(jìn)樣量超過柱容量時(shí)，則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡，將會導(dǎo)致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現(xiàn)性不好。因此對于復(fù)雜樣品需要準(zhǔn)確分離，必須使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子，目前實(shí)驗(yàn)室使用常見的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。
一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑；對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長使用壽命等。
現(xiàn)在商品化的液相色譜柱琳瑯滿目，根據(jù)參數(shù)可以給我們提供一個(gè)初步的選擇，但由于各個(gè)儀器廠商的填料技術(shù)和鍵合技術(shù)都有差異，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等。所以在選擇前要好好研究參數(shù)，仔細(xì)閱讀說明書，才能找到合適的色譜柱和適宜的分離方法。