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你知道著名的高效液相色譜法特點(diǎn)以及使用方法嗎
閱讀：1642 發(fā)布時間：2020-9-15
高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點(diǎn)：
①高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。
②高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達(dá)到優(yōu)質(zhì)分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
?、鄹哽`敏度：紫外檢測器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在µL數(shù)量級。
?、軕?yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。
⑤分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成，一般小于1h。
此外HPLC還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長，相互補(bǔ)充。HPLC的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。HPLC檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
色譜柱的填料和流動相的組分應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學(xué)鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠很是常用,辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用；離子交換填料,用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等，用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數(shù)微升。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測器為紫外吸收檢測器。
在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應(yīng)符合紫外分光光度法項(xiàng)下對溶劑的要求。
正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變,
以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢。 2.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
按各品種項(xiàng)下要求對儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對照品對儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整,應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求；或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的小理論板數(shù)、分離度和拖尾因子.