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固相萃取儀基本操作四步走介紹
閱讀：952 發(fā)布時(shí)間：2021-6-15
固相萃取儀（SPE）是近年發(fā)展起來一種樣品預(yù)處理技術(shù)，由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過程，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、省力。廣泛用在醫(yī)藥、食品、環(huán)境、商檢、化工等領(lǐng)域。
固相萃取儀操作“四步走”規(guī)定：
1.活化
萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜使SPE填料保持濕潤(rùn)，因?yàn)樘盍细稍飼?huì)降低樣品保留值，而各小柱的干燥程度不一，也會(huì)影響回收率的重現(xiàn)性。先用甲醇等水溶性有機(jī)溶劑沖洗填料，因?yàn)榧状寄軡?rùn)濕吸附劑表面，并滲透到非極性的硅膠鍵合相中，使硅膠更容易被水潤(rùn)濕；然后再加入水或緩沖液沖洗，創(chuàng)造和樣品溶劑相容的環(huán)境并提高回收率。
2.上樣
?、儆?.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié)，使pH=9，離心取上層液萃取；
?、谟眉状?、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，以水或緩沖液稀釋后萃?。?/div>
?、塾盟峄驘o機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液，調(diào)節(jié)pH值后萃??；
④超聲15min后加入水、緩沖液，取上清液萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min，流速快不利于待測(cè)物與固定相結(jié)合。
3.淋洗
反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液，可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個(gè)小柱的容積，而SPE濾膜為5-10ml。
4.洗脫
應(yīng)選用5-10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測(cè)物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度，則可先將洗脫液揮干后，再用流動(dòng)相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水，可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測(cè)物，再用極性較強(qiáng)的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。
若待測(cè)物可電離，可調(diào)節(jié)pH值，抑制樣品離子化，以增強(qiáng)待測(cè)物在反相SPE填料中的保留，洗脫時(shí)調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫，收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到理想分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速，用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫，回收率更高。