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昆山伯利克精密儀器有限公司

引物合成儀溶解和保存引物的方式

時間:2022-1-17 閱讀:3686
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  引物合成儀合成步驟:
  1、脫掉附加在CPG擔(dān)體上的第一個堿基5' -OH基團(tuán)上的保護(hù)基 (DMTr),準(zhǔn)備附加下一個新的堿基;
  2、活化新的堿基單體,準(zhǔn)備與第一個堿基進(jìn)行反應(yīng);
  3、第二個堿基與第一個堿基發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng);
  4、將沒有反應(yīng)的第一個堿基的5' -OH加帽封死 ,使其不再進(jìn)一步參與反應(yīng);
  5、將核苷亞磷酸酯氧化成更穩(wěn)定的核苷磷酸酯 (即將三價磷氧化成五價磷)。
  6、重復(fù)進(jìn)行1~5的循環(huán),直至合成完所需的Oligo DNA序列。
  7、合成結(jié)束后,將Oligo DNA分子從CPG上切下,再進(jìn)行進(jìn)一步的純化。

  引物合成儀溶解和保存引物的方式:
  干燥后的引物質(zhì)地非常疏松,開蓋前最好離心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,將引物粉末收集到管底。根據(jù)計算出的體積加入去離子無菌水或 10mM Tris pH7.5 緩沖液,室溫放置幾分鐘,振蕩助溶,離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水,因?yàn)橛行┱麴s水的 pH 值比較低( pH4-5 ) , 引物在這種條件下不穩(wěn)定。
  引物合成后,經(jīng)過一系列處理和純化步驟,旋轉(zhuǎn)干燥而成片狀物質(zhì)。引物在溶解前,室溫狀態(tài)下可以長期保存。溶解后的引物 -20 度可以長期保存。如果對實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高,合成的 OD 數(shù)較大,建議分裝,避免反復(fù)凍融。修飾熒光引物需要避光保存。


引物合成儀

 

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