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蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗

播放:306          上傳時間:2022-07-18

什么是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗:
在GB4789.14標(biāo)準(zhǔn)中,在進(jìn)行蠟樣芽胞桿菌鑒定時蠟樣芽胞桿菌與蘇云金芽孢桿菌生化反應(yīng)相同,但蘇云金芽孢桿菌在形成芽孢的同時,會在芽孢旁形成一顆菱形、方形或不規(guī)則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體,稱為伴孢晶體,該晶體易被堿性染料著色,因此常用0.5%堿性復(fù)紅染料進(jìn)行染色觀察。而蠟樣芽胞桿菌和其他芽孢桿菌不產(chǎn)生伴孢晶體。這個染色實驗就是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗。

操作步驟:

培養(yǎng)芽孢:將待測菌株接種至硫酸錳營養(yǎng)瓊脂平板,30±1℃培養(yǎng)24±2h,并于室溫放置3-4天。若芽孢產(chǎn)生不豐富,可在室溫繼續(xù)放置2-3天后觀察。
原理:芽孢桿菌在營養(yǎng)條件缺乏時,開始形成芽孢,因此在進(jìn)行細(xì)菌產(chǎn)芽孢相關(guān)試驗時,通常需進(jìn)行5-7天的放置或培養(yǎng),待培養(yǎng)基內(nèi)營養(yǎng)耗盡,可獲得更豐富的芽孢。
制片染色:挑取培養(yǎng)物少許于載玻片上,滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥,微火固定后,加甲醇作用 30 s 后傾去,再通過火焰干燥,于載玻片上滴滿 0.5%堿性復(fù)紅,放火焰上加熱(微見蒸氣,勿使染液沸騰)持續(xù) 1 min~2 min,移去火焰,再更換染色液再次加溫染色 30 s,傾去染液用潔凈自來水*清洗、晾干后鏡檢。觀察有無游離芽胞(淺紅色)和染成深紅色的菱形蛋白結(jié)晶體。
(注:在菌苔生長密集的地方營養(yǎng)消耗更快,更容易產(chǎn)生芽孢,因此挑取密集生長處的菌苔制片易觀察到更多芽孢)



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