Pierce BCA 蛋白質(zhì)檢測試劑盒是一種高精度、與去污劑兼容的蛋白質(zhì)檢測試劑盒，用于測定蛋白質(zhì)濃度。 Pierce BCA 試劑可準確測定蛋白質(zhì)研究中遇到的大多數(shù)樣品類型的蛋白質(zhì)濃度。 Pierce BCA 測定可用于評估全細胞裂解物、親和柱級分、純化蛋白質(zhì)樣品的產(chǎn)量，以及監(jiān)測工業(yè)應用中的蛋白質(zhì)污染。與大多數(shù)染料結合方法相比，BCA 測定法受蛋白質(zhì)成分差異的影響要小得多，因此濃度精度更高。
提供的試劑盒選項包括 Pierce 免稀釋 BSA 蛋白質(zhì)標準品，這是一組七個預稀釋的 BSA 標準品，包裝在多通道移液器友好的試管中。試管條包括一個空管，使用戶能夠添加自己的樣品緩沖液以進行空白扣除。
BCA 蛋白質(zhì)檢測試劑盒的特點包括：
• 比色法— 目視估計或使用標準分光光度計或酶標儀在 562 nm 處進行測量
• 準確— 顯示通過染料結合方法 (Bradford) 觀察到的蛋白質(zhì)間變異的一半
• 兼容—不受大多數(shù)離子型和非離子型去污劑典型濃度的影響
• 測定時間短— 孵育30分鐘；比傳統(tǒng)的 Lowry 方法更簡單，速度快四倍
• 檢測范圍寬 — BSA 的線性工作范圍為 20 至 2000 µg/mL
• 靈敏— 使用增強協(xié)議檢測低至 5 µg/mL
•不再需要連續(xù)稀釋— 套件選項包括稀釋- 免費 BSA 蛋白質(zhì)標準品，無需在生成標準曲線時進行連續(xù)稀釋 測定原理 BCA 蛋白質(zhì)
測定
結合在堿性介質(zhì)中通過蛋白質(zhì)將Cu 2+還原 為 Cu 1+的特性與高靈敏度以及亞銅陽離子 (Cu 1+）由二辛可寧酸（BCA）制成。第一步是銅與蛋白質(zhì)在堿性環(huán)境中螯合，形成淺藍色復合物。在這種稱為縮二脲反應的反應中，含有三個或更多氨基酸殘基的肽在含有酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合物。
在顯色反應的第二步中，BCA 與第一步中形成的還原（亞銅）陽離子發(fā)生反應。兩個 BCA 分子與一個亞銅離子螯合產(chǎn)生深紫色反應產(chǎn)物。 BCA/銅復合物是水溶性的，并且隨著蛋白質(zhì)濃度的增加，在 562 nm 處表現(xiàn)出很強的線性吸光度。該復合物的靈敏度（檢測下限）比第一個反應的淡藍色靈敏約 100 倍。
該反應受到蛋白質(zhì)氨基酸序列中四個氨基酸殘基（半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸和色氨酸）的強烈影響。然而，與考馬斯染料結合方法（即 Bradford）不同，通用肽主鏈也有助于顏色形成，有助于最大限度地減少蛋白質(zhì)成分差異引起的變異性。
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