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上海撫生ELISA流程的說明
閱讀：1289 發(fā)布時間：2019-7-5
上海撫生ELISA流程的說明
上海撫生物科技有限公司是一家專注于生物的技術(shù)企業(yè)，主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的、銷售。并代理銷售，致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué) 、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué) ELISA試劑盒等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。目前很多客戶因?yàn)閷ζ放频男湃味葐栴}，公司仍然是一個非常好的選擇上海撫生ELISA試劑盒，是 你不二的選擇。
剩余的試劑盒材料要妥善保存
標(biāo)準(zhǔn)品分裝后按說明書要求的溫度保存，這樣可以避免污染，對要求冷凍保存的標(biāo)準(zhǔn)品還可以避免反復(fù)凍融；酶標(biāo)板放回錫箔紙袋，加入干燥劑，封緊封口，4℃保存。忌未將酶標(biāo)板*平衡至室溫，就放回錫箔紙袋，因?yàn)榇藭r由于溫度差，酶標(biāo)板上會有水汽，不利于穩(wěn)定保存。
加樣要快速準(zhǔn)確，避免氣泡
加樣時間宜控制在 15 分鐘內(nèi)。加樣前要將樣本混勻，特別是凍存后融化的樣本（自然融化的血清等樣本會有分層現(xiàn)象），應(yīng)上下顛倒充分混勻，注意動作輕緩，避免產(chǎn)生氣泡。如凍存融化后的樣本有沉淀，可以再次離心。整個加樣過程都要注意避免產(chǎn)生氣泡。氣泡會影響蛋白的相互結(jié)合，而影響反應(yīng)進(jìn)行。
孵育時要保證溫度均勻，防止揮發(fā)變干
孵育時壓緊封口膜。多塊板一起實(shí)驗(yàn)時，要平放各板，不要疊放，以免因溫度不均造成漂移或邊緣效應(yīng)。
洗板機(jī)的應(yīng)用
使用洗板機(jī)，不但可以降低勞動強(qiáng)度，而且有利于保證 ELISA 測試的穩(wěn)定性。目前的全自動洗板機(jī)不但具有很多實(shí)用的洗滌動作，如底部沖洗，兩點(diǎn)吸液，震動，交叉吸液；還可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)沖洗壓力，沖洗距離，沖洗時間等參數(shù)。通過優(yōu)選這些動作和參數(shù)，能保證良好的洗滌效果。洗板機(jī)的性能對于結(jié)果準(zhǔn)確性影響也很大，好的洗板機(jī)要保證洗板后的殘留液盡可能的少，一般不超過 2μL，以洗滌后用人工拍板墊紙不濕為準(zhǔn)。應(yīng)定期檢查抽吸針頭是否堵塞。洗液如果含有吐溫，應(yīng)隨用隨配。
手動洗板的操作指南
加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應(yīng)新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板，選用無粉塵和碎屑的吸水紙。需要用力拍板，使孔內(nèi)沒有可見液體掛壁；但也不能太重，不能讓樣品干太久。酶標(biāo)板拍干后立即做后續(xù)的加液。
顯色反應(yīng)的關(guān)鍵點(diǎn)
ELISA 實(shí)驗(yàn)是個酶促底物顯色反應(yīng)，隨時間增加，顯色變深，所以選擇*佳時間終止反應(yīng)是得到準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)的曲線和樣本濃度的重要因素。終止過程要*。使用的 TMB 底物時*終止點(diǎn)是黃色，不會有任何程度的藍(lán)色或綠色，終止過程中必要時可以震蕩 96 孔板，或用槍頭抽吸混勻（終止液含強(qiáng)酸，避免腐蝕）。
數(shù)據(jù)分析
按照說明書推薦的數(shù)據(jù)分析方法做曲線擬合及分析。說明書中的標(biāo)準(zhǔn)曲線是在的實(shí)驗(yàn)室中，由非常有經(jīng)驗(yàn)的操作人員得到的結(jié)果?？蛻舻臉?biāo)準(zhǔn)曲線和說明書中的標(biāo)準(zhǔn)曲線可能存在不同，但不等于不好。通常判斷標(biāo)準(zhǔn)曲線合格的標(biāo)準(zhǔn)為：：背景OD 值 <0.2；點(diǎn) OD 值>1.0；相關(guān)系數(shù) R2 接近或等于 1。只要滿足這些條件的標(biāo)準(zhǔn)曲線都是可以使用的。