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微囊藻毒素是一類具生物活性的單環(huán)七肽，這類毒素主要由淡水藻類銅綠微囊藻 (Microcystins aeruginosa) 產(chǎn)生。微囊藻毒素有不同的脂多糖和極性，毒性也不同，微囊藻毒素 -LR 是最早被闡明化學(xué)結(jié)構(gòu)的藻毒素，在對藻 毒素的研究中也多以它作為研究對象。 微囊藻毒素是一種肝毒素，能抑制蛋白質(zhì)磷酸酯酶，從而幫助解除對細(xì)胞增殖的正常的制動作用，促進腫瘤的 發(fā)育。微囊藻毒素雖然主要存在于藻細(xì)胞中，但研究表明藻細(xì)胞死亡解體后，不斷有藻毒素釋放到水體，對人類的 生活飲用水源造成危害，肝癌高發(fā)率與生活飲用水源中的水華大量發(fā)生有關(guān)。 《GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的測定》規(guī)定了高效液相色譜法測定水中微囊藻毒素（環(huán)狀七肽）。標(biāo) 準(zhǔn)適用于生活飲用水、湖泊水、河水、地表水中微囊藻毒素的測定，檢出限為 0.1 μg/L。

世界衛(wèi)生組織 (WHO) 在其推薦的生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)（第二版）中也增加了微囊藻毒素（MC-LR, 1 μg/L）等 指標(biāo)（WHO. 1998），其中都有關(guān)于微囊藻毒素 -LR 的檢測。各國已有生活飲用水中的藻毒素含量標(biāo)準(zhǔn)一般都為 微囊藻毒素 -LR 的含量。世界衛(wèi)生組織 (WHO) 推薦的飲水中的藻毒素標(biāo)準(zhǔn)為 1 中可接受的藻毒素標(biāo)準(zhǔn)為 0.5 μg/L（Guidelines for Canadian Drinking Water Quality, 1993）。

實驗儀器：

1.1 試劑與儀器 1.1.1 試劑： 甲醇：HPLC 級 水： 超純水 （TFA）：色譜純 微囊藻毒素 -LR 標(biāo)準(zhǔn)儲備液：10 μg/mL 1.1.2 儀器： LC-20A，包括 CBM-20Alite 系統(tǒng)控制器；LC-20AD 高精度溶液輸送泵 ×2；DGU-20A5 在線脫氣機；SIL- 20A 自動進樣器；CTO-20A 柱溫箱；SPD-M20A 二極管陣列檢測器。

1.2 分析條件 色譜柱：Inertsil ODS-SP 5 μm 4.6×250 mm 流動相：B －甲醇 A/B=40/60 (v/v) 流速：1.0 mL/min 洗脫方式：等度洗脫 柱溫：40℃ 進樣量：20 μL 二極管陣列檢測器波長：238 nm 

1.3 樣品處理 1.3.1 微囊藻毒素 -LR 標(biāo)準(zhǔn)系列濃度的配制 微囊藻毒素 -LR 的標(biāo)準(zhǔn)儲備液濃度為 10 μg/mL。取不同體積，用甲醇稀釋，配制成濃度為 0.20、0.50、1.00、 2.00 及 4.00 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列，儲存在棕色小瓶中，備用。

1.3.2 水樣的制備 取水樣 5000 mL，于杯式濾器中經(jīng) 0.45 μm 濾膜減壓過濾。濾液中加 10 mL 甲醇混勻后過 C18 反相固相萃取柱。 C18 反相固相萃取柱用前先用甲醇活化，再用超純水活化。將水樣以 5~10 mL/min 的流速流過固相萃取柱進行富 集濃縮。裝樣完畢后，用體積分?jǐn)?shù)５％甲醇水溶液 10 mL 淋洗以凈化樣品，待固相萃取柱吹干，以 10 mL 甲醇洗 脫并經(jīng)過濾器過濾后收集于濃縮瓶內(nèi)。洗脫液氮吹濃縮至 1.0 mL，上機測試。

結(jié)果討論：

2.1 微囊藻毒素 -LR 校準(zhǔn)曲線結(jié)果 圖 1 是濃度為 1.0 μg/mL 的微囊藻毒素 -LR 標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖。圖 2 是五個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液采集得到的色譜圖。 圖 3 是微囊藻毒素 -LR 的校準(zhǔn)曲線及方程。曲線的相關(guān)系數(shù)為 r=0.9995。

2.2 方法的重復(fù)性 為進一步考察該方法的重復(fù)性，本文分別對濃度為 0.5 μg/mL，1.0 μg/mL，2.0 μg/mL 的微囊藻毒素 -LR 標(biāo) 準(zhǔn)品進行 6 次平行實驗，重復(fù)性結(jié)果（RSD% 表示）匯總?cè)缦卤怼?圖 2 五個不同濃度的微囊藻毒素 -LR 標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖 圖 3 微囊藻毒素 -LR 校準(zhǔn)曲線 Y = aX + b a = 2.52163e-005 b = 0.107292 r= 0.9995 0 50000 100000 Area 0 1 2 3 4 Conc. 

結(jié)論：

本實驗中使用 LC-20A 液相色譜系統(tǒng)，開發(fā)了水樣中微囊藻毒素 -LR 的檢測方法。本法具有便捷、線性、重復(fù) 性好和靈敏度高等優(yōu)點。