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利用HILIC 定量分析中國益母草-植物中極性化合物的分析
閱讀：876 發(fā)布時間：2020-12-29摘要：生物堿水蘇堿是中藥 (TCM) 中所用的 50 種基本草藥之一中國益母草 (Leonurus japonicus) 中的主要活性成分。水蘇堿的高極性意味著它在反相色譜分析中基本不會被保留，植物基質中許多其他極性化合物的共洗脫也使水蘇堿的分析非常有挑戰(zhàn)性。親水相互作用色譜 (HILIC) 是分析極性化合物的一種簡單、強大的解決方案。Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱能夠直接從植物提取物中分離出水蘇堿并實現(xiàn)定量測定。該色譜柱結合了先進的兩性離子固定相組成和表面多孔顆粒填料，可在低反壓操作條件下提供優(yōu)異的峰形和分離度。
前言使用 ：Agilent Infinity Lab Poroshell 120, 2.7 µm HILIC-Z 從益母草 (Leonurus japonicus) 分離出水蘇堿。由于水蘇堿的紫外信號較弱，因此采用蒸發(fā)光散射檢測器 (ELSD) 進行檢測。同時開發(fā)了等度和梯度兩種方法。
試劑與化學品所有試劑均為 HPLC 級或更高等級。HPLC 級乙腈購自 J. T. Baker (Center Valley, PA, U.S.A.)。水經由 EMD Millipore Milli-Q Integral 系統(tǒng) (Darmstadt, Germany) 純化。乙酸銨購自 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)。鹽酸水蘇堿和益母草 (L. japonicus) 由上海詩丹德標準技術服務有限公司（中國上海）提供。
儀器和材料 • Agilent InfinityLab 接頭 • 色譜柱前端：Quick Connect 快速連接接頭（部件號 5067-5965） • 色譜柱末端：Quick Turn 接頭（部件號 5067-5966） • Agilent Captiva 經濟型過濾器，聚丙烯膜，直徑 13 mm，孔徑 0.2 µm（部件號 5190-5265） • 安捷倫樣品瓶，螺口，棕色，帶書寫簽，經認證，2 mL， 100/包（部件號 5182-0716） • 安捷倫固定螺口蓋，帶 PTFE/紅色硅膠隔墊（部件號 5190-7024） • 安捷倫樣品瓶內插管，250 µL，去活玻璃，帶聚合物支腳（部件號 5181-8872） • Agilent InfinityLab 溶劑瓶，棕色，1000 mL（部件號 9301-6526） • Agilent InfinityLab Stay Safe 溶劑瓶安全蓋，GL45， 3 口，1 個放空閥（部件號 5043-1219） • Eppendorf 移液器和連續(xù)分液器 • 超聲儀 (VWR, Radnor, PA, USA) • 渦旋器和多管渦旋器 (VWR, Radnor, PA, USA)
儀器 • Agilent 1260 Infinity II 二元泵 (G7112B) • Agilent 1260 Infinity II 樣品瓶進樣器 (G7129C) • Agilent 1260 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116A) • Agilent 1290 Infinity II ELSD (G7102A) • 超低擴散工具包 (5067-5189) • Agilent OpenLAB 軟件樣品前處理將鹽酸水蘇堿標準品溶于 70% 乙醇中，制得濃度為 0.5 mg/mL 的標樣，無需進一步樣品前處理即可直接進樣。植物提取物按照以下步驟進行制備： 1. 稱取 1 g 益母草 (L. japonicus) 干粉 2. 將 25 mL 70% 乙醇加入錐形瓶中，并對整個容器稱重 3. 使溶液回流 2 小時，冷卻后再次稱重 4. 加入 70% 乙醇補充失去的重量 5. 搖勻，并通過 0.2 µm PTFE 膜針頭過濾器（部件號 5190- 5265）對提取物進行過濾 6. 如有必要，用乙腈將提取物稀釋至所需濃度
結論：成功地從益母草 (L. japonicus) 中分離出水蘇堿。同時開發(fā)了等度和梯度方法，這兩種方法均可使水蘇堿與共存于提取物中的極性和非極性化合物得到*分離。