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動物源性食品中wu氯酚殘留量的測定-安捷倫三重四級桿液質
閱讀：1408 發(fā)布時間：2020-3-22摘要：本文參照 GB 23200.92-2016，使用 Agilent Bond Elut PAX 小柱結合高靈敏度 Agilent 6470 三重四極桿液質聯用系統(tǒng)開發(fā)出一種測定動物源性食品中wu酚殘留量的方法。
前言：五lv酚 (pentachlorophenol, PCP) 作為氯代烴類殺蟲劑和滅真菌劑，被廣泛地用作農業(yè)殺 蟲劑、除蟲劑等。五lv酚不僅具有致畸、致癌、致突變等作用，還具有生物蓄積作用，在 高有機質含量的酸性土壤或沉積物中具有很高的吸附性，可被植物吸收并進入食物鏈， 終危害人體健康。農業(yè)部公告第 235 號規(guī)定所有的動物源性食品中禁用五lv酚鈉，在動 物源食品中不得檢出[1]。 在常規(guī)方法中，提取、凈化、氮吹等前處理操作會導致回收率偏低、重復性不好；色 譜梯度條件會導致五lv酚附近出現明顯基質干擾，使得分析結果不準確。本文參照 GB 23200.92-2016[2]，通過優(yōu)化各前處理步驟及色譜梯度條件，使五lv酚在肌肉、雞蛋、蝦 和牛奶基質中回收率均大于 80%，且重復性 RSD (n = 3) 小于 5%，結果穩(wěn)定可靠。
實驗部分：試劑和樣品 乙腈、甲醇，色譜純，購于 J&K Scientific；氨水、甲酸、乙酸， 分析純，購于 J&K Scientific；五lv酚鈉標準品，純度 94.5%，購 于 Dr. Ehrensorfer；樣品均為市售產品。
提取：肌肉、雞蛋、蝦等 稱取均質試樣 2 g，置于 50 mL 具螺旋蓋聚丙烯離心管中，加入 2 mL 水，均質化 1 min，加入 5 mL 5% 氨水乙腈溶液，渦旋混 合 1 min，超聲提取 5 min。在 4 °C 下以 9000 r/min 的轉速離心 5 min，移取上清液置于另一試管中。離心后的殘渣用 5 mL 5% 氨水乙腈溶液重復上述提取步驟 1 次，合并上清液，混勻。待 凈化。 提?。号Ｄ?稱取均質試樣 2 g，置于 50 mL 具螺旋蓋聚丙烯離心管中，加入 10 mL 5% 氨水乙腈溶液，渦旋混合 1 min，超聲提取 5 min。在 4 °C 下以 9000 r/min 的轉速離心 5 min，移取上清液置于另一試 管中。待凈化。 凈化 Agilent Bond Elut Plexa PAX 小柱經 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 將提取步驟得到的上清液全部上樣到 Bond Elut Plexa PAX 小柱 上，棄去流出液。依次用 5 mL 5% 氨水溶液、5 mL 甲醇、5 mL 2% 甲酸甲醇-水溶液（由 4% 甲酸甲醇溶液與水等體積混合得 到）進行淋洗。待淋洗液*通過小柱后，棄去流出液，用真空 泵抽干固相萃取柱 2 min。以 3 mL 8% 甲酸甲醇溶液洗脫，抽干 小柱；將洗脫液收集到干凈的 15 mL 具刻度試管中，加水定容至 4 mL，混勻。溶液過 Agilent PTFE-Q 針頭過濾器后待分析。
色譜條件 系統(tǒng)： Agilent 1290 Infinity II LC 色譜柱： Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (2.1 × 50 mm, 1.8 µm) 流動相 A： 5 mmol/L 乙酸銨溶液 流動相 B： 甲醇 進樣量： 20 µL 柱溫： 25 °C梯度條件： 時間 (min) B (%) 0.0 40.0 7.0 100.0 7.5 40.0 12.0 40.0
質譜條件 系統(tǒng)： Agilent 6470 三重四極桿液質聯用系統(tǒng) 離子源： ESI干燥氣溫度： 300 °C 干燥器流速： 5 L/min 霧化器壓力： 45 psi 鞘氣溫度： 250 °C 鞘氣流速： 11 L/min 掃描模式： MRM 毛細管電壓： 3500 V(-) 噴嘴電壓： 500 V(-)
結果與討論 本文所述方法適用于牛奶、肌肉、雞蛋和蝦中五lv酚殘留量的測 定。方法在 0.25–2.5 ng/mL 范圍內表現出良好的線性（基質匹配 校準曲線），R2 > 0.99，如圖 3–6 所示。
基質效應 ME = K1/K2，K1 為基質匹配校準曲線斜率，K2 為標 準溶液曲線斜率。當 ME 值為 1 時，表示無基質效應；ME 值小 于 1，則基質抑制；ME 值大于 1，則基質增強。通常認為 ME 在 0.8–1.2 范圍內，基質效應不顯著。通過不同基質的基質效應 ME 的計算，說明 Bond Elut Plexa PAX 對肌肉等基質有較好的凈化效果，且基質效應不顯著（見表 2）。從圖 7–10 的色譜對比圖中可以看出，通過對 GB 23200.92- 2016[2] 梯度條件的調整，在豬肉、雞蛋、蝦肉和牛奶基質中，wu 氯酚的出峰位置無基質干擾，可以進行準確的定量分析。 如表 3 所示，五lv酚添加濃度為 1、2、4 μg/kg 時，各種基質的 回收率均在 80% 以上，RSD 均小于 5%。本方法對五lv酚的定量 限為 1 µg/kg。
結論：本文采用 Bond Elut Plexa PAX 小柱結合 HPLC-MS/MS，優(yōu)化建 立了動物源性食品中五lv酚殘留量測定的分析方法。文中采用的 Bond Elut Plexa PAX 小柱采用*的新型羥基化外表面、疏水 性內部結構和高級聚合物骨架，這種高級材料具有單分散粒徑分 布，流動特性出色，極少出現柱床堵塞。Agilent PTFE-Q（親水 PTFE）針頭過濾器同時兼容水相和有機溶劑，通過嚴格的質控保 證，具有極低的溶出，且對五lv酚沒有吸附作用。 通過對以上耗材的選用及前處理步驟的優(yōu)化，該方法五lv酚出峰 附近無明顯基質干擾，添加濃度為 1、2、4 μg/kg 時，各種基質 的回收率均在 80% 以上，RSD 均小于 5%，結果穩(wěn)定可靠。