賽默飛（Thermo Fisher）7500實時熒光定量PCR儀（7500 Real-Time PCR System）的基本操作使用方法，供參考：
一、開機準備
1、儀器檢查
確認電腦與7500主機連接正常，電源線、數(shù)據(jù)線無誤。
檢查散熱模塊（如風扇）無遮擋。
2、開機順序
先打開電腦，待系統(tǒng)啟動后，再開啟7500主機電源（主機開關(guān)位于背面或側(cè)面）。
3、啟動軟件
雙擊桌面上的 "7500 Software v2.x"（版本號可能不同）進入操作界面。
二、7500pcr實驗設(shè)置
1、創(chuàng)建新實驗
點擊 "New Experiment"，選擇實驗類型（如Standard Curve、Comparative Ct等）。
設(shè)置反應(yīng)體積（通常為20-50 μL）和檢測通道（FAM/SYBR Green, VIC/HEX等）。
2、設(shè)置反應(yīng)板布局
在軟件界面中點擊板圖（Plate Layout），右鍵選擇樣品類型（標準品、待測樣品、陰性對照等）。
輸入樣品名稱、濃度（標準品需設(shè)置梯度）和重復數(shù)。
3、設(shè)置PCR程序
預變性階段：95℃, 10分鐘（激活熱啟動酶）。
擴增循環(huán)（40-45個循環(huán)）：
變性：95℃, 15秒
退火/延伸：60℃, 1分鐘（溫度根據(jù)引物TM值調(diào)整）。
熔解曲線階段（SYBR Green實驗需添加）：
95℃→60℃→95℃，緩慢升溫（如0.3℃/秒）。
三、加樣與上機
1、準備反應(yīng)體系
按試劑盒說明書配制Master Mix（含酶、dNTPs、緩沖液等），加入模板DNA和引物/探針。
混勻后分裝至96孔或384孔反應(yīng)板，避免氣泡。
2、放置反應(yīng)板
將反應(yīng)板放入儀器樣品槽，確保孔位方向與軟件板圖一致。
關(guān)閉儀器蓋，確保密封。
四、運行程序
1、啟動運行
在軟件中點擊 "Start Run"，確認反應(yīng)板信息和程序無誤后提交。
儀器將自動運行溫控和熒光信號采集。
2、實時監(jiān)控
在運行過程中可查看擴增曲線、熒光閾值（Threshold）和基線（Baseline）設(shè)置。
五、數(shù)據(jù)分析
1、查看結(jié)果
運行結(jié)束后，軟件自動生成擴增曲線、熔解曲線（如設(shè)置）和Ct值。
調(diào)整基線范圍（通常為3-15個循環(huán)）和閾值線至指數(shù)擴增期。
2、導出數(shù)據(jù)
點擊 "Export" 導出Ct值、熒光數(shù)據(jù)為Excel或文本格式。
使用軟件內(nèi)置工具或第三方軟件（如GraphPad）進行相對定量（ΔΔCt法）或絕對定量（標準曲線法）。
六、關(guān)機與維護
1、關(guān)機順序
先關(guān)閉軟件，再關(guān)閉7500主機電源，最后關(guān)閉電腦。
2、清潔維護
定期用70%乙醇擦拭樣品槽表面，避免污染。
每月運行一次儀器自檢程序（可在軟件中找到）。
如需更詳細的操作步驟，建議參考 《Thermo Fisher 7500 User Manual》 或參加培訓。不同實驗（如基因表達分析、SNP檢測）可能需要調(diào)整具體參數(shù)。
