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光學(xué)儀器
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超微量分光光度計(jì)怎么檢查性能

時(shí)間:2025/7/1閱讀:136
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超微量分光光度計(jì)作為常用的核酸、蛋白等生物大分子的定量和表征工具,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)和生物制藥等領(lǐng)域,用戶僅需微量樣品即可快速獲得濃度及吸光度結(jié)果。然而在日常使用中,一些用戶會(huì)對(duì)測(cè)量結(jié)果有疑慮,尤其是當(dāng)測(cè)量結(jié)果與預(yù)估的結(jié)果出現(xiàn)較大差異,或與使用其他方法的定量結(jié)果有差異時(shí),用戶往往會(huì)懷疑設(shè)備出現(xiàn)問題或故障。其性能檢查是確保儀器準(zhǔn)確性和可靠性的重要步驟,以下是對(duì)超微量分光光度計(jì)性能檢查的一些建議:


一、檢查前的準(zhǔn)備

1、確保儀器處于穩(wěn)定狀態(tài):檢查儀器是否放置平穩(wěn),避免震動(dòng)和干擾。

2、檢查光源:確保光源(如氙氣閃光燈)正常工作,無閃爍或亮度不均現(xiàn)象。

3、檢查檢測(cè)器:確保檢測(cè)器靈敏度高,能夠準(zhǔn)確檢測(cè)微弱光信號(hào)。

4、校準(zhǔn)儀器:使用標(biāo)準(zhǔn)溶液(如重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液)進(jìn)行校準(zhǔn),確保儀器測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。


二、性能檢查

1、標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)量

常用的標(biāo)準(zhǔn)品可使用BSA或核酸標(biāo)準(zhǔn)品,可從各試劑廠家購買,或使用如BCA定量試劑盒,QUBIT核酸定量試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品。請(qǐng)注意標(biāo)準(zhǔn)品一定要在效期之內(nèi),且保存得當(dāng)(通常低溫)。也可以使用設(shè)備廠家提供的小分子化合物標(biāo)準(zhǔn)品,如Implen提供的PHP標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)品是有等級(jí)區(qū)分的,通常附帶有檢定證書的標(biāo)準(zhǔn)品,標(biāo)稱濃度會(huì)更準(zhǔn)確。    特別指出的是,使用未知濃度的樣品,來評(píng)估不同設(shè)備的測(cè)量結(jié)果,并以其中一臺(tái)作為基準(zhǔn),判定另外一臺(tái)的準(zhǔn)確性,是錯(cuò)誤的。

2、重復(fù)性測(cè)量

在缺乏標(biāo)準(zhǔn)品,或標(biāo)準(zhǔn)品由于保存不當(dāng)狀態(tài)已存疑時(shí),可使用未知濃度樣品做重復(fù)性測(cè)試。這可以判斷設(shè)備的穩(wěn)定性,以排除一些潛在問題,如樣品臺(tái)損壞、樣品的非均質(zhì),成分干擾等。雖然不能確定準(zhǔn)確性誤差,但重復(fù)性很好的設(shè)備,很大幾率是沒有大問題的。當(dāng)然,這需要結(jié)合您的允差要求,綜合考量。

3、梯度稀釋測(cè)量

使用已知濃度或未知濃度的樣品,均可進(jìn)行梯度稀釋測(cè)量,以驗(yàn)證設(shè)備的線性穩(wěn)定性。使用設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)曲線功能可便捷地完成此項(xiàng)測(cè)試,并給出線性回歸。當(dāng)梯度稀釋的R2趨近于1,設(shè)備的線性可滿足廣泛的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)的測(cè)量要求,同時(shí)也可反映設(shè)備的良好狀態(tài)。需要注意的是,梯度稀釋時(shí)一定要選擇定期校準(zhǔn)過的,準(zhǔn)確性好的移液器,且正確操作。

4、基線穩(wěn)定性測(cè)量

 光源和CCD檢測(cè)器,作為設(shè)備的核心組件,其穩(wěn)定性對(duì)于設(shè)備而言是非常重要的,而基線測(cè)量可以很好地反映這些部件的狀態(tài)。使用水(或空氣)作為空白,并且用水(或空氣)作為樣品,做多次重復(fù)測(cè)量,如果吸光值的漂移很小,通??煞从吃O(shè)備的光學(xué)系統(tǒng)組件狀態(tài)正常。


三、性能檢查后的處理

1、記錄檢查結(jié)果:詳細(xì)記錄各項(xiàng)性能檢查的結(jié)果和數(shù)據(jù),以便后續(xù)分析和比較。

2、分析檢查結(jié)果:對(duì)檢查結(jié)果進(jìn)行分析和評(píng)估,判斷儀器是否滿足使用要求。

3、調(diào)整或校準(zhǔn)儀器:根據(jù)檢查結(jié)果,對(duì)儀器進(jìn)行調(diào)整或校準(zhǔn),確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。

4、制定維護(hù)計(jì)劃:根據(jù)儀器的使用情況和性能檢查結(jié)果,制定定期維護(hù)和保養(yǎng)計(jì)劃,延長(zhǎng)儀器的使用壽命和保持其準(zhǔn)確性。


超微量分光光度計(jì)的性能檢查是確保其準(zhǔn)確性和可靠性的重要步驟。通過全面的性能檢查,可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)并解決問題,確保儀器在科研和實(shí)驗(yàn)中的準(zhǔn)確性和可靠性。

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