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入/核/電/轉(zhuǎn)Lonza Nucleofector
超高引用值得信賴
非病毒轉(zhuǎn)染


Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)
細胞轉(zhuǎn)染有許多不同的方式,常用于實驗室的就是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒轉(zhuǎn)染以及電穿孔法。
傳統(tǒng)的電穿孔技術(shù)需要摸索步驟進行優(yōu)化,轉(zhuǎn)染位置為胞質(zhì),細胞毒性大,轉(zhuǎn)染效率難以得到保證。但Lonza公司對電穿孔技術(shù)進行了優(yōu)化,通過配合高效率的細胞轉(zhuǎn)染液、預(yù)置的優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染程序,直接將外源基因?qū)肽繕?biāo)細胞,實現(xiàn)更高轉(zhuǎn)染效率、更高細胞存活率,最快在轉(zhuǎn)染2小時后就能觀察到轉(zhuǎn)染基因的蛋白表達。

原理與優(yōu)勢

Nucleofector技術(shù)原理:高效的非病毒的DNA轉(zhuǎn)運,適用于原代細胞或是細胞系,可直接轉(zhuǎn)運入細胞核。
主要優(yōu)勢:
· 基因轉(zhuǎn)染效率高
· 轉(zhuǎn)染與細胞分裂無關(guān)
· 可實現(xiàn)非分裂細胞的轉(zhuǎn)染,如神經(jīng)元細胞
· 更快的基因表達
· 通用性:可轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA,DNA單鏈,mRNA或是siRNA,可適用于原代細胞或是細胞系。

不同轉(zhuǎn)染模塊

Core Unit:核心模塊,控制系統(tǒng),能夠加載程序,實現(xiàn)細胞轉(zhuǎn)染功能。

X Unit:能夠?qū)崿F(xiàn)懸浮細胞的轉(zhuǎn)染,可以以20ul,100ul的體系進行轉(zhuǎn)染。

Y Unit:能夠?qū)崿F(xiàn)貼壁細胞的轉(zhuǎn)染,可直接在24孔板內(nèi)進行轉(zhuǎn)染。

96-well Unit:可在96孔板內(nèi)進行檢測,可應(yīng)用于原代細胞以及難轉(zhuǎn)染細胞。

實驗步驟簡單

Step 1:將目標(biāo)細胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中收集起來。

Step 2:將細胞與轉(zhuǎn)染試劑、需轉(zhuǎn)入的物質(zhì)(DNA或siRNA)混勻,并轉(zhuǎn)入電極杯中。

Step 3:選擇合適的程序,將電極杯或電極條插入儀器中,按下Start按鈕。

Step 4:用培養(yǎng)基沖洗,將細胞沖洗下來

Step 5:將沖洗后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中,在一定時間后即可檢測轉(zhuǎn)染效率。

基因表達快速


TMR標(biāo)記的DNA表達eGFP的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染新生兒皮膚成纖維細胞(NHDF-neo),兩小時后用 3.5%PFA固定,共聚焦顯微鏡可觀察到GFP蛋白在細胞核內(nèi)表達。
05
應(yīng)用領(lǐng)域多樣

免疫、腫瘤、代謝、神經(jīng)等研究領(lǐng)域的不同細胞,難以進行轉(zhuǎn)染的細胞、無法分裂的細胞,都可以實施轉(zhuǎn)染。
06提供多種工具

從轉(zhuǎn)染方法到細胞培養(yǎng)知識,不同的轉(zhuǎn)染細胞種類,適用的不同轉(zhuǎn)染方法,都能在Lonza找到答案。