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隨著NK細(xì)胞治療熱度的持續(xù)攀升，其合規(guī)生產(chǎn)也越來越受重視，本文重點(diǎn)講述了幾個(gè)不同來源NK細(xì)胞的工藝開發(fā)案例和未來展望：
一、PB-NK/外周血NK：
*滋養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)
收集健康供體單采血，并從中分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，再用VarioMACS設(shè)備去除T細(xì)胞后，將其轉(zhuǎn)移到A-350N透氣袋中與輻照后的自體PBMC共培養(yǎng)，添加OKT3和IL-2，經(jīng)14天培養(yǎng)，可以獲得高純度的NK細(xì)胞(>98%，CD3?CD16+CD56+），且擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)520-860。
*無滋養(yǎng)細(xì)胞
此外，也有研究開發(fā)了無滋養(yǎng)細(xì)胞，符合GMP的NK細(xì)胞規(guī)模化生產(chǎn)工藝。取代滋養(yǎng)細(xì)胞的是可以表達(dá)IL-21和41BB配體的膜顆粒。
首先用CliniMACS Prodigy系統(tǒng)去除CD3+T細(xì)胞，并通過膜顆粒刺激NK細(xì)胞并在Prodigy中初步擴(kuò)增；然后轉(zhuǎn)移到Xuri波浪生物反應(yīng)器中通過灌流培養(yǎng)進(jìn)行規(guī)模擴(kuò)增。
最后，NK細(xì)胞通過LOVO設(shè)備進(jìn)行清洗收獲，并使用CBS 2101降溫儀進(jìn)行低溫保存。該工藝在不到2周的時(shí)間內(nèi)可以使PB-NK細(xì)胞擴(kuò)增1000倍，而且NK細(xì)胞在該平臺(tái)培養(yǎng)40多天之后，可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)10^8倍的擴(kuò)增效果，同時(shí)保持細(xì)胞毒性潛能。
