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應(yīng)用分享 | TPO用途之iPSC體外分化“人造血小板

2024-3-11  閱讀(248)

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Chaselection逐典現(xiàn)推出血小板生成素(TPO)、重組人干細(xì)胞因子(SCF)、酪氨酸蛋白激酶受體(FLT3)組合加油包,無動(dòng)物源,非標(biāo)簽純化,高純度、高活性、高安全性,支持造血干細(xì)胞,iPSC等細(xì)胞的體外培養(yǎng)與定向分化。

近年來,關(guān)于造血干細(xì)胞相關(guān)研究成為行業(yè)研究的熱點(diǎn)。18年在頂級(jí)生命科學(xué)期刊《Cell》上發(fā)表了日本京都大學(xué)細(xì)胞研究與應(yīng)用中心Ito等人的研究“湍流激活血小板的生物發(fā)生使其體外制備達(dá)到臨床應(yīng)用規(guī)模"(Turbulence Activates Platelet Biogenesis to Enable Clinical Scale Ex Vivo Production)[1],文章一經(jīng)發(fā)表就引起業(yè)界的高度關(guān)注。研究表明人造血小板,準(zhǔn)確地說,是使用誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(Induced pluripotent stem cell,iPSC)制備血小板的“生產(chǎn)效率"初步達(dá)到了臨床實(shí)際應(yīng)用的水平,人造血小板開始從“實(shí)驗(yàn)臺(tái)來到病床邊"。

iPSC是體外血小板生成的來源細(xì)胞

iPSC具有多向分化和自我更新的能力,能在體外無限增殖。與胚胎干細(xì)胞相比,iPSC來源于體細(xì)胞,通過重編程來重獲干性,來源不受限,無倫理爭(zhēng)議[2]。



圖1.誘導(dǎo)多能干細(xì)胞可以在體外被間接擴(kuò)增,并被誘導(dǎo)分化為任何類型的細(xì)胞[3]。


通常,再生障礙性貧血(即“再障")或其他疾病造成的嚴(yán)重血小板減少,需要進(jìn)行血小板輸血。采用血小板進(jìn)行治療的一般過程:先采集患者細(xì)胞,制備成iPSC細(xì)胞。接著,再把iPSC細(xì)胞制備成造血祖細(xì)胞,再分化成巨核細(xì)胞,并冷凍作為主細(xì)胞庫,巨核細(xì)胞可以長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。最后,由巨核細(xì)胞制備血小板用于相應(yīng)疾病的治療。

在培養(yǎng)造血干細(xì)胞或促進(jìn)iPSC的定向分化過程中需要使用細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)節(jié)。細(xì)胞周期由4個(gè)期組成:G1期、S期(合成期)、G2期和M期(有絲分裂期)。HSC 是處于 G0 期靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞。HSC的負(fù)向調(diào)控因子(TGF-β、MIP-1α、p38)主要在細(xì)胞周期關(guān)卡(checkpoint)進(jìn)行調(diào)節(jié),抑制細(xì)胞進(jìn)入G0期。而一些 HSC 正向調(diào)控因子(SCF、FL3、TPO)可以使細(xì)胞走出G0期,開始擴(kuò)增,因而在HSC的培養(yǎng)過程中,細(xì)胞因子的選擇至關(guān)重要。



圖2 細(xì)胞因子調(diào)節(jié) HSC 的細(xì)胞周期[4]

逐典血小板生成素TPO

逐典血小板生成素(TPO)分子量約19 kDa,分子序列和野生型同源性大于98%,采用E.coli原核表達(dá)系統(tǒng),不含動(dòng)物源成分,通過非標(biāo)簽純化方式,大幅度降低外源金屬離子引入風(fēng)險(xiǎn),其純度>95%,內(nèi)毒素<0. 1 EU/μg,在保證安全性的同時(shí)大大提高了產(chǎn)品的特異性,滿足您的需求。

01產(chǎn)品特點(diǎn)

原核表達(dá)系統(tǒng),無動(dòng)物源成分

活性高,比活≥1×107 units/mg

非標(biāo)簽純化,外源金屬離子引入風(fēng)險(xiǎn)低

02產(chǎn)品數(shù)據(jù)

1.電泳(SDS-PAGE)



采用SDS-PAGE分離,顯示蛋白分子量約19kDa,且未見雜蛋白,與天然蛋白類似

2.活性(Bioactivity)-Bioactivity CELL BASE



通過對(duì)人Mo7e(巨細(xì)胞白血-病細(xì)胞株)細(xì)胞進(jìn)行增殖劑量依賴性刺激實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明ED50≤1.0ng/ml,對(duì)應(yīng)的比活性≥1×107單位/mg。

參考文獻(xiàn)

[1] Ito Y, Nakamura S, Sugimoto N, Shigemori T, Kato Y, Ohno M, Sakuma S, Ito K, Kumon H, Hirose H, Okamoto H, Nogawa M, Iwasaki M, Kihara S, Fujio K, Matsumoto T, Higashi N, Hashimoto K, Sawaguchi A, Harimoto KI, Nakagawa M, Yamamoto T, Handa M, Watanabe N, Nishi E, Arai F, Nishimura S, Eto K. Turbulence Activates Platelet Biogenesis to Enable Clinical Scale Ex Vivo Production. Cell. 2018 Jul 26;174(3):636-648.e18.

[2] 岳偉,顧?;?誘導(dǎo)多能干細(xì)胞體外分化血小板技術(shù)的研究進(jìn)展[J].中國(guó)輸血雜志,2023,36(09):851-856.

[3] Sugimoto N, Eto K. Generation and manipulation of human iPSC-derived platelets. Cell Mol Life Sci. 2021 Apr;78(7):3385-3401.

[4] 田菁,蔣永平.細(xì)胞因子在人造血干細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)中的作用研究進(jìn)展[J].生物醫(yī)學(xué)工程與臨床,2013,17(05):507-512.


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