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在分子生物學(xué)研究范疇中，報(bào)告基因（reporter gene）作為常用的基因工具，發(fā)揮著不可替代的重要作用。報(bào)告基因是一種編碼易被檢測(cè)的蛋白質(zhì)基因，與目的基因融合表達(dá)后，其表達(dá)產(chǎn)物可以用來(lái)標(biāo)定目的基因的表達(dá)情況。通常通過(guò)直接測(cè)定報(bào)告基因mRNA、蛋白或酶活性來(lái)檢測(cè)報(bào)告基因是否在細(xì)胞中表達(dá)。
在分子生物學(xué)研究中，報(bào)告基因確實(shí)是一個(gè)非常重要的工具。報(bào)告基因是一種編碼易被檢測(cè)的蛋白質(zhì)的基因，當(dāng)它與目的基因融合后，可以通過(guò)檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)產(chǎn)物來(lái)了解目的基因的表達(dá)情況。報(bào)告基因的表達(dá)產(chǎn)物可以是mRNA、蛋白質(zhì)或酶等，這些產(chǎn)物可以被特定的檢測(cè)方法所識(shí)別和測(cè)量。
作為報(bào)告基因，在遺傳選擇和篩選檢測(cè)方面必須具有以下幾個(gè)條件：
① 已被克隆和全序列已測(cè)定；
② 表達(dá)產(chǎn)物在受體細(xì)胞中不存在，且在被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中無(wú)相似的內(nèi)源性表達(dá)產(chǎn)物；
③ 其表達(dá)產(chǎn)物能進(jìn)行定量測(cè)定。
除此之外，理想的報(bào)告基因還應(yīng)做到細(xì)胞內(nèi)其它基因的產(chǎn)物不會(huì)干擾報(bào)告基因產(chǎn)物的檢測(cè)，并且產(chǎn)物檢測(cè)方法應(yīng)該快速、簡(jiǎn)便、靈敏度好且重復(fù)性好。
隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，報(bào)告基因的種類越來(lái)越豐富。綠色熒光蛋白基因（GFP）因其易于檢測(cè)、熒光性質(zhì)穩(wěn)定、無(wú)細(xì)胞毒性、可用于活細(xì)胞檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，而被廣泛用于生命科學(xué)研究。用395nm的紫外線和475nm的藍(lán)光激發(fā)，GFP可在508nm處自行發(fā)射綠色熒光，無(wú)需輔助因子和底物，用常規(guī)的熒光顯微鏡即可定性檢測(cè)胞內(nèi)表達(dá)情況。增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP）突變體，發(fā)射出的熒光強(qiáng)度比野生型GFP大6倍以上，因此，比GFP更適合作為一種報(bào)告基因來(lái)研究基因表達(dá)、調(diào)控、細(xì)胞分化及蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)定位和轉(zhuǎn)運(yùn)等。
除常見(jiàn)的GFP外，紅色熒光蛋白在1999年被報(bào)道，以其能夠與GFP共同使用，解決一些GFP單獨(dú)解決不了的科學(xué)問(wèn)題，同時(shí)因其激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)更長(zhǎng)，在細(xì)胞內(nèi)成像時(shí)背景低等優(yōu)點(diǎn)，受到廣大科研工作者的青睞。如mCherry是一種紅色熒光蛋白的變種，來(lái)自于mushroom coral的紅色熒光蛋白，被廣泛用于生物技術(shù)作為示蹤劑的紅色熒光染料，包括分子的標(biāo)記和細(xì)胞組分的定位等。表現(xiàn)出熒光亮度及光穩(wěn)定型，以及更低的細(xì)胞毒性。
螢火蟲(chóng)螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)為560nm左右的生物螢光（bioluminescence），是目前體內(nèi)外檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中常用螢光素酶，可作為對(duì)照研究靶基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的翻譯效率，細(xì)胞活力和體內(nèi)成像測(cè)定。
逐典螢光素酶報(bào)告基因
針對(duì)報(bào)告基因檢測(cè)不同的側(cè)重需求，逐典推出了3種檢測(cè)系統(tǒng)。
逐典螢光素酶報(bào)告基因特點(diǎn)：
1. 檢測(cè)靈敏度高，信號(hào)穩(wěn)定性好
HEK293-NFK B-LUC細(xì)胞加入梯度稀釋的TNF 在37C、5%CO條件下刺激6小時(shí)后,分別用增強(qiáng)型、超敏型、穩(wěn)定型檢測(cè)試劑進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。
2. 操作方便
僅需將底物和螢光素酶檢測(cè)緩沖液混合后直接加入到細(xì)胞即可。
3. 穩(wěn)定性好
同時(shí)在10次反復(fù)凍融實(shí)驗(yàn)中，逐典全系列報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒顯示出較強(qiáng)的穩(wěn)定性。
