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螢光素酶在ATP、Mg2+和O2的條件下催化D-螢光素鉀鹽進(jìn)行氧化脫羧反應(yīng)，發(fā)出平均波長(zhǎng)為560nm的藍(lán)綠色熒光。當(dāng)螢光素鉀鹽過
量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與螢光素酶的濃度呈正相關(guān)性。由于其方便檢測(cè)、定量準(zhǔn)確、在生物技術(shù)領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用，特別是體內(nèi)活體成
像領(lǐng)域和報(bào)告基因技術(shù)領(lǐng)域。
二，D-螢光素鉀鹽的使用方法
1. 溶液的制備
D-熒光素鉀鹽的溶液可以用于染色、標(biāo)記、檢測(cè)等多種應(yīng)用。
制備D-熒光素鉀鹽溶液的方法：
a.首先稱取適量的D-熒光素鉀鹽，加入適量的去離子水中后進(jìn)行均勻攪拌；
b.使用過濾膜將溶液過濾，除菌。
c.將D-熒光素鉀鹽溶液調(diào)節(jié)至所需要的濃度。
2. 染色實(shí)驗(yàn)過程
D-熒光素鉀鹽可以用于細(xì)胞染色、組織染色等染色實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
a.首先將細(xì)胞或組織樣本固定在載玻片上。
b.然后加入適量的D-熒光素鉀鹽溶液，使試劑溶液可以覆蓋樣本。
c.在黑暗條件下可以孵育一段時(shí)間，使D-熒光素鉀鹽充分滲透入細(xì)胞或組織中。
d.使用PBS緩沖液洗滌樣本，去除多余的D-熒光素鉀鹽。
e.在顯微鏡下觀察樣本，觀察樣品的熒光信號(hào)。
3. 實(shí)驗(yàn)標(biāo)記
D-熒光素鉀鹽也可以用于標(biāo)記蛋白質(zhì)、核酸等生物分子。
實(shí)驗(yàn)標(biāo)記方法：
a.首先將蛋白質(zhì)或核酸與d-熒光素鉀鹽共同孵育。
b.再用凝膠電泳等方法分離標(biāo)記后的生物分子。
c.最后在熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記后的生物分子即可。
4. 檢測(cè)方法
D-熒光素鉀鹽可用于檢測(cè)生物分子的存在和濃度。
D-熒光素鉀鹽檢測(cè)方法：
a.將d-熒光素鉀鹽與待檢測(cè)的生物分子進(jìn)行共同孵育。
b.用凝膠電泳等方法分離孵育后的混合物。
c.在熒光顯微鏡下觀察熒光信號(hào)，即可判斷生物分子的存在和濃度。
三，逐典D-螢光素鉀鹽優(yōu)勢(shì)
1.高純度（HPLC驗(yàn)證純度≥99%)
2.優(yōu)異的生物發(fā)光性能
3.高溶解度（>40mg/ml)
四，應(yīng)用場(chǎng)景
D-熒光素鉀鹽在不同領(lǐng)域具有多種應(yīng)用場(chǎng)景。其中包括蛋白表達(dá)研究、抗腫瘤或抗病物研究以及mRNA疫苗開發(fā)等。
蛋白表達(dá)研究：將Luc基因插入需要研究的蛋白中，可用于定量目標(biāo)蛋白在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的表達(dá)情況。
抗腫瘤或抗病物：在腫瘤細(xì)胞或病毒中導(dǎo)入Luc基因，建立腫瘤或病毒感染小鼠模型，注射藥物后，通過活體成像技術(shù)觀測(cè)腫瘤大小或病毒感染的變化。
mRNA疫苗開發(fā)：在mRNA中插入Luc基因，脂質(zhì)體包裹后注射實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，可通過活體成像技術(shù)可觀測(cè)疫苗的免疫效果。
五，應(yīng)用案例分享
