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逐典Chaselection-全能核酸酶常見問題答疑

2023-12-28  閱讀(266)

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Q1:核酸酶適用于哪些領(lǐng)域的哪些環(huán)節(jié)?

A1:核酸酶主要用于去除下游純化中的HCD,降低粘度。應用領(lǐng)域主要集中在基因治療、細胞治療的病毒載體生產(chǎn),使用環(huán)節(jié)是下游純化,UFDF環(huán)節(jié)之前。

 

Q2:核酸酶的使用濃度是多少?

A2:一般的病毒載體純化使用濃度是20-50 U/ml,溶瘤病毒的話使用濃度會高一些,可能會到100-150 U/ml。

 

Q3:蛋白不溶,需要在變性條件下純化,pannarase核酸酶可以在尿素環(huán)境下消化核酸么?

A3:核酸酶在6M尿素條件下活性先增加,當尿素濃度到7M時,核酸酶會在15min后變性失活。因此在這個濃度下可適當提高核酸酶添加量補償活性損失。

 

Q4:當反應溫度低于37℃,如何保證pannnarase的消化效果?

A4:體系固定的條件下,核酸酶的消化效果取決于酶的用量、反應溫度和反應時間。溫度較低時,建議延長酶解時間,避免加入過多核酸酶造成殘留過高。

 

Q5:怎樣滅活pannarase核酸酶?如何去除?

A5:使用EDTA螯合金屬離子可以可逆的抑制核酸酶的活性,條件會造成失活,如100mM NaOH,70℃處理30min等。核酸酶可采用陰離子交換柱從產(chǎn)物中分離出去。

 

Q6:產(chǎn)品應如何進行稀釋?

A6:正確稀釋比例是1:1000~1:20000,原儲存液中含有50%甘油,酶液不會在-20℃凍結(jié),但在不含甘油的緩沖稀釋液中的酶需要盡快用掉,不推薦凍結(jié)后再次使用。

 

Q7:核酸酶的去除方法有哪些?

A7:切向流過濾、色譜法、濾器、陰離子層析等。

 

Q8:細菌或細胞裂解液里的核酸酶應該如何去除?

A8:隨著工藝去除雜蛋白時會一并去除,不用特意純化 。

 

Q9:Pannarase耐高鹽核酸酶的來源與特點?

A9: Pannarase耐高鹽核酸酶(EC 3.1.31.1)是一種來源于Staphylococcus aureus的熱穩(wěn)定非特異性核酸內(nèi)切酶(Thermonuclease),具有耐鹽和高溫穩(wěn)定性。

Q10:耐高鹽核酸酶的鹽離子耐受范圍

A10:0-500 mM NaCl均能保持活性15%以上。


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